HC-5404 is a novel, potent and highly selective PERK (Protein kinase RNA-like Endoplasmic Reticulum Kinase) inhibitor, blocking the activation of the PERK pathway, which in turn inhibits the endoplasmic reticulum stress response signaling pathway, thereby exerting anti-tumor effects, and can be used to treat advanced solid tumors and renal cell Cancer.

选择HEK-293细胞系，使用不同浓度的HC-5404处理30分钟后，加入1mmol/L的吐温霉素处理4小时。处理后的细胞用RIPA缓冲液裂解，通过Westernblot检测PERK的磷酸化水平（p-PERK）和ATF4的表达水平。使用特异性抗体识别p-PERK（T982）和ATF4。结果显示，HC-5404能够浓度依赖性地抑制内质网应激诱导的PERK自磷酸化（p-PERK），其IC50值为23nmol/L。同时，HC-5404也能抑制ATF4的表达，其IC50值为88nmol/L。总体而言，HC-5404能够有效抑制内质网应激引起的PERK激活和ATF4表达[1]。

在肾癌细胞系（如786-O、A-498、Caki-1等）的皮下移植瘤模型中，HC-5404通过口服给药（剂量范围3-100 mg/kg，每天两次）进行治疗。定期测量肿瘤体积并计算肿瘤生长抑制率（TGI）和肿瘤回归率。单剂量口服给药后，HC-5404在小鼠血浆中的暴露量呈剂量依赖性增加，最大浓度（Cmax）在给药后1小时内达到，平均半衰期为2.22小时。在30 mg/kg和100 mg/kg剂量下，游离药物浓度分别为186 nmol/L和839 nmol/L。在小鼠胰腺组织中，HC-5404能够以时间和剂量依赖的方式抑制p-PERK，单剂量口服30 mg/kg后，早期p-PERK的抑制率约为90%。在786-O肿瘤模型中，30 mg/kg的剂量方案（每天两次）显示出最佳的抗肿瘤活性，肿瘤生长抑制率达到48%。此外，HC-5404与VEGFR-TKI联用时，在多种肾癌模型中展现出显著的协同作用[1]。