EDANS (EDANS acid [5-((2-Aminoethyl)amino)naphthalene-1-sulfonic acid]) is a novel and quenched fluorogenic substrate for assaying retroviral protease by resonance energy transfer (RET).

EDANS是开发基于FRET的蛋白酶底物和核酸探针最受欢迎的供体之一。在基于FRET的探针中，EDANS通常与DABSYL或DABCYL配对使用。其荧光特性对环境敏感。

一、蛋白酶活性检测
实验步骤：
1.准备EDANS底物溶液： 将EDANS标记的底物溶解在适当的缓冲液中（如PBS或实验缓冲液），浓度通常为1-50 μM，具体根据实验要求调整。
2. 加入蛋白酶： 将蛋白酶（如逆转录酶或其他蛋白酶）加入EDANS底物溶液中。
3. 孵育反应： 在最适温度下孵育反应体系，通常为30-60分钟。
4. 荧光检测： 使用荧光分光光度计或荧光测量仪，激发波长通常为340 nm，发射波长约为490 nm，检测EDANS的荧光信号。
5.数据分析： 根据荧光强度分析蛋白酶活性，荧光信号强度越高，表示蛋白酶活性越强。
二、 FRET实验（EDANS作为供体）
实验步骤：
1.准备带有EDANS和FRET受体（如DABCYL）的底物： 合成或购买带有EDANS作为供体荧光分子的底物，DABCYL作为接受体荧光分子。
2.加入酶或蛋白酶： 将酶或蛋白酶加入底物溶液中并允许反应发生。
3.荧光测量： 激发波长为340 nm，监测接受体的发射波长（如DABCYL的发射波长约为460 nm）。
4. 结果分析： 在底物切割后，EDANS和DABCYL之间的能量转移会减少，荧光信号变化可用来监测酶活性。
三、 酶动力学与抑制剂研究：
实验步骤：
1. 准备底物和酶溶液： 在不同浓度的EDANS标记底物和酶溶液中进行实验。
2. 抑制剂研究： 添加不同浓度的抑制剂，研究其对酶活性的影响。
3.孵育与荧光检测： 按照蛋白酶活性检测的方式孵育反应，并测量荧光信号，从而计算酶动力学参数或抑制常数（IC50）。
注意事项：
1.缓冲液的兼容性： 确保使用的缓冲液不会淬灭或干扰荧光信号。通常使用磷酸盐缓冲液（PBS）或Tris缓冲液。
2.蛋白酶抑制剂： 在进行抑制剂研究时，使用适当的蛋白酶抑制剂以确保实验的特异性，避免其他非靶向酶的干扰。
3.荧光测量的敏感性： 使用合适的荧光滤光片进行准确的荧光检测。EDANS的激发波长为340 nm，发射波长约为490 nm。