6-CFDA N-succinimidyl ester (Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl) is capable of spontaneously and irreversibly binding to free amines. Utilized in flow cytometry experiments for tracking cell division in both mammalian cells and bacteria. Used in combination with several cell permeabilizers as an effective, nondestructive fluorescencent stain to quickly detect bacterial cells.

使用方法
一、溶液配置
1.母液配置：6-CFDA N-succinimidyl ester 溶解在无水的二甲基亚砜（DMSO）中，通常配制为 1–10 mM 的浓度。
2.工作液配置：将 6-CFDA 溶液稀释到浓度为 1–10 μM待用。
二、操作步骤
细胞标记反应
1.细胞处理： 将待标记的细胞培养在适宜的生长环境中。为了增加细胞对染料的摄取，可以使用细胞透化剂（如 Triton X-100 或表面活性剂）。
2.染料加入： 将工作液加到培养基中，与细胞一起培养，细胞在标记溶液中孵育 30 分钟至 1 小时，室温或 37°C。
3.反应终止： 用含有培养基的缓冲液或 PBS (磷酸盐缓冲盐水) 洗涤细胞，去除未结合的染料。
4. 检测与分析：
a. 荧光显微镜： 使用荧光显微镜观察标记的细胞，激发波长为 492 nm，发射波长为 517 nm。
b. 流式细胞术： 通过流式细胞仪分析细胞的荧光强度，以检测细胞的标记和分裂情况。
细胞分裂追踪：
1.在流式细胞术中，6-CFDA 常用于细胞分裂实验。标记后的细胞分裂后，荧光信号会均匀分布到子细胞中，从而追踪细胞分裂进程。
细菌标记：6-CFDA 也可用于细菌细胞标记。在细菌细胞透化后，染料能够进入细菌细胞并标记其内部分子。