Xanthine Oxidase Assay Kit (Microanalysis)

XOD 催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：

1.细菌、细胞样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液CB0196M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液CB0196M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织样品的制备：
组织：按照组织质量（g）：提取液CB0196M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液CB0196M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤

1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 290nm，蒸馏水调零。
2.XOD工作液现用现配，配置方法见产品组成列表。
3.测定前将 XOD工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
4.在微量石英比色皿或 96 孔板（UV板）中加入下列试剂：

四、XOD活性计算公式：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1.血清(浆)XOD 计算：
单位的定义：每毫升血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T = 2131×ΔA
2.组织、细菌或细胞中 XOD 计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 2131×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 2131×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T =4.26×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，2.6×10^-4 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×10⁴ L/ mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下：
1.血清(浆)XOD 计算：
单位的定义：每毫升血清(浆)每分钟催化产生 1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样÷T = 4262×ΔA
2.组织、细菌或细胞中 XOD 计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 4262×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W× V样÷V样总)÷T = 4262×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总)÷T =8.52×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，2.6×10^-4 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×10⁴ L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万, 10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。