Trehalose Content Assay Kit (Spectrophotometry)

采用蒽酮比色法，具有灵敏度高、简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿﹑研钵、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。

二、海藻糖提取：
1.细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0132S-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0132S-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次），室温静置 45min，振荡 3~5 次，冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清。
2.组织的处理：按照组织质量（g）：CB0132S-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，加入 1mL CB0132S-ES），冰浴匀浆，室温静置 45 min，振荡 3~5 次，冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清。
3.血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：CB0132S-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL 血清（浆）加入 1mL CB0132S-ES），冰浴匀浆，室温静置 45min，振荡 3~5 次，冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min，调节波长到 620 nm，蒸馏水调零。
2.调节水浴锅至 95 ℃。
3.标准品的准备：临用前加 1 mL 蒸馏水溶解，初始溶液浓度为 10 mg/mL（2-8℃可保存两周）；再将标准品用蒸馏水稀释到0.2、0.15、0.1、0.05、0.025、0.0125、0mg/mL备用。
4.工作液的配制：临用前取一瓶CB0132S-A加入4.5mL 蒸馏水后，缓慢加入 25.5mL 浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用；用不完的试剂 4℃可保存一周。
5.标准曲线的建立：取 0.25mL 标准液和 1mL 工作液至 EP 管中，95℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，取 1mL 至比色皿中，在 620nm 处测吸光值 A；根据标准管的浓度 （x，mg/mL）和吸光度 A标准（y，A标准），建立标准曲线。
6.样本测定：取 0.25mL 样本和 1mL 工作液至 EP 管中，95 度水浴 10 min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，在 620 nm 波长下记录测定吸光度值 A。

四、计算公式：
根据标准曲线，将 A测定(y，A测定)带入公式计算样本浓度(x，mg/mL)
1.按样本鲜重计算：
海藻糖含量 (mg/g 鲜重) = V1×x÷(W×V1÷V2)=x÷W
2.按样本蛋白浓度计算：
海藻糖含量(mg/mg prot)= V1×x÷(V1×Cpr)=x÷Cpr
3.按细菌或细胞密度计算：
海藻糖含量 (μg/10⁴ cell)=(1000×V1×x)÷(500 ×V1÷V2)=2x
4.血清(浆)海藻糖含量计算:
海藻糖含量(mg/mL)=(V1×x)÷(V3×V1÷V2)=10x
注： 1000：1mg/mL=1000µg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；V2：加入CB0132S-ES总体积 1mL；V3：加入血清(浆体积)，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万

1.由于工作液具有强腐蚀性，请谨慎操作。
2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定，计算时注意同步修改公式。
3.建议用于除海藻糖外不含其他可溶性糖样本的测定。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。