Total Mercapto Assay Kit (Microanalysis)

巯基基团与 5,5'- 二硫代-双-硝基苯甲酸 (DTNB) 反应，生成黄色化合物，在 412 nm 处有 最大吸收峰。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰和蒸馏水。

二、样品的制备：
1.动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0179M-ES）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.血清，培养液：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。
2.标准品的制备：临用前加入1.3 mL 蒸馏水，浓度为 25 µmol/mL，再用蒸馏水稀释至0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0 μmol/mL的标准液，现用现配。
3.在 EP 管或96孔板中按顺序加入下列试剂：

四、总巯基含量计算公式：
总巯基标准曲线绘制：以标准液浓度为x轴，A标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定代入公式得到x(μmol/mL)。
1.组织样本
(1)按样本质量计算
总巯基含量 (μmol/g) =x×V样总÷W=x÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
总巯基含量 (μmol/mg prot) =x×V样总÷(Cpr×V样总)=x÷Cpr

2.血清、培养液
总巯基含量 (μmol//L) =x×V样÷(V样×10³)=1000x
注：V样：反应中样品体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；10³：1mmol/ L=10³ μmol/ L。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。