Total Antioxidant Capacity Assay Kit (Microanalysis)

在酸性环境下，还原 Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的 Fe²⁺-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：

可见光分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰、浓硫酸和双蒸水。

二、样品的制备：

1.血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。
2.组织样品
按照组织质量（g）：CB0206M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0206M-ES）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.细胞样品
按照细胞数量（10⁴个）：CB0206M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0206M-ES），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃ 离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：

1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 593nm，蒸馏水调零。
2.标准曲线制作：
临用前在CB0206M-标准品中加入900μL 蒸馏水，再滴加20μL 浓硫酸，制备40 μmol/mL FeSO₄ 标准溶液；将40μmol/mL FeSO₄ 标准溶液用蒸馏水稀释至0.2 、0.1 、0.05 、0.025 、0.0125 、0.00625 、0.003125 、0.00156μmol/mL，吸取100μL 标准溶液（蒸馏水作空白）加入100μL 试CB0206M-B，充分混匀，反应10min，测定593nm下的吸光度，计算ΔA=A标准-A空白，此时Fe²⁺终浓度为0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156、0.00078 μmol/mL。
3.在微量玻璃比色皿/96 孔板中按列表中顺序加入上述试剂：

注意：空白管只需测定一次。

四、总抗氧化能力计算公式：

1.标准曲线绘制
以Fe²⁺终浓度为横坐标(x)，以ΔA 为纵坐标(y)绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b，将ΔA 带入方程求得x(μmol/mL)。
2.计算公式：
单位定义：样本的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值(ΔA)所需的标准液离子浓度(μmol/mL)表示。
(1)按蛋白浓度计算
总抗氧化能力(μmol/mg prot)=x×V反总÷(V样×Cpr)=34×x÷Cpr
(2)按样本质量计算
总抗氧化能力(μmol/g 质量)=x×V反总÷(V样÷V样总×W)=34×x÷W
(3)按细胞数量计算
总抗氧化能力(μmol/10⁴ cell)=x×V反总÷V样×V样总÷细胞数量=34×x÷细胞数量
(4)按液体体积计算
总抗氧化能力(μmol/mL)=x×V反总÷V样=34×x
V样总：加入提取液体积，1mL；V反总：反应总体积，0.204mL；V样：反应中样本体积，0.006mL；W：样本质量，g；Cpr ：样本蛋白浓度，mg/mL ；细胞数量：以10⁴ 为单位，以万计。

1.尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
2.样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。
3.如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测定。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。