TAL Assay Kit (Microanalysis)

TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸，使反应溶液333nm下的吸光度随反应时间而上升，根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0214M-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0214M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0214M-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0214M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）果汁等液体样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.酶标仪预热30min以上，调节波长至333nm。
2.准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。
3.CB0214M-B的配置：临用前在CB0214M-B瓶中加入10mL CB0214M-A充分溶解待用（用不完的试剂4℃保存一周，注意现配现用），在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
4.在EP管中依次加入如下试剂

四、TAL活性计算：
1.血清(浆)或果汁TAL活性
酶活单位定义：
每分钟每mL血清(浆)或果汁在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
TAL(U/mL) = ΔA×V反总÷(V样÷V样总)÷0.005÷T = 35×ΔA
2.组织、细菌或细胞TAL活性
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
TAL(U/mg prot) = ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.005÷T = 35×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算：
单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
TAL(U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T = 35×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使333nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
TAL(U/10⁴ cell) = ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T = 0.07×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1.05mL；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入CB0214M-ES体积，1 mL；T：反应时间，60 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
注：V反总：反应体系总体积，0.42mL；V样：加入样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液(CB0214M-ES)体积，1 mL；T：反应时间，60 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。