Superoxide Anion Assay Kit (Microanalysis)

Name: Superoxide Anion Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0193M
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0193M

别名 超氧阴离子含量检测试剂盒（微量法）

超氧阴离子（superoxide anion, O₂^-）是一种通过向氧中添加电子而产生的短命自由基，它是由紫外光、香烟烟雾、环境污染物和γ射线等环境因素，或是由红色素氧化酶或NADPH氧化酶等氧化酶形成的。O₂^-一旦形成，就会攻击细胞成分，对脂质、蛋白质和DNA造成损害。这会引发许多疾病，包括癌症、动脉粥样硬化、类风湿关节炎、糖尿病、肝损伤和中枢神经系统疾病。超氧阴离子在免疫系统中起着关键作用，保护动物免受感染。高活性氧阴离子由受刺激的白细胞释放，包括单核细胞、巨噬细胞和多形核白细胞。在免疫细胞中，超氧化物阴离子是由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酶（NADPH）氧化酶产生的。

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 1,253	4-6日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成 NO₂^-，NO₂^-在对氨基苯磺酸和 α-萘胺的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在 530nm 处有特征吸收峰，根据 A530 值可以计算样品中 O₂^-含量，反应式为：NH₂OH + 2O₂^-＋H^＋→ NO₂^-＋ H₂O₂ ＋ H₂O

产品规格

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0193M-ES	110mL×1瓶	4℃保存；
CB0193M-A	12ml×1瓶	4℃保存；
CB0193M-B	8mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0193M-C	8mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0193M-D	氯仿，自备	室温保存；
CB0193M-Standard (10μmol/mL)	0.5ml×1瓶	4℃保存。

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、台式离心机、天平、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。

二、超氧阴离子提取：
1.植物、动物组织：
植物、动物组织：按照组织质量（g）：CB0193M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入 1mL CB0193M-ES）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。
2.血清或培养液：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至 530nm，蒸馏水调零；
2.CB0193M-B在 25℃水浴锅中预热 30 min；
3.标准品的制备：用蒸馏水将标准品稀释为0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125、0.00390625μmol/mL的标准溶液；
4.按顺序加入下列试剂：

试剂名称	空白管（μL）	测定管（μL）	标准管（μL）
样本		40
标准品			40
CB0193M-ES	100	60	60
CB0193M-A	80	80	80
混匀，37℃水浴 20min
CB0193M-B	60	60	60
CB0193M-C	60	60	60
混匀，37℃水浴 20min
CB0193M-D	100	100	100
混匀，8000rpm，25℃，离心 5min，小心吸取上层水相 200μL，测定 A530；计算∆A 标准=A标准管-A空白管，∆A 样本=A测定管-A空白管。（空白管只需做 1-2 次。）

四、超氧阴离子含量计算公式：
标准曲线的绘制：以∆A标准为y轴，标准溶液浓度为x轴，绘制标准曲线y=kx+b。
1.组织：
(1)按照样本质量计算
超氧阴离子含量 (μmol/g) =2x×V样本÷(V样本÷V提取×W)=2x÷W
超氧阴离子产生速率 (μmol/g·min) =2x×V样本÷(V样本÷V提取×W)÷T=0.1x÷W
(2)按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量 (μmol/mg prot) =2x×V样本÷(V样本×Cpr)=2x÷Cpr
超氧阴离子产生速率 (μmol/mg prot·min) =2x×V样本÷(V样本×Cpr)÷T=0.1x÷Cpr
2.血清或培养液：
超氧阴离子含量 (μmol/mL)=2x
超氧阴离子产生速率 (μmol/mL·min) =2x÷T=0.1x
注：V提取：加入提取液体积，1 mL；V样本：反应中样品体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2: 2分子O₂^-参与反应生成 1 分子 NO₂^-。

注意事项

1.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定，并注意计算公式里乘以相应倍数。
2.样品制备好后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
3.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.CB0193M-D (氯仿) 有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。