Starch Assay Kit (Microanalysis)

利用80％乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。

二、淀粉提取：
1.称取0.03g新鲜样本于研钵中研碎，加入0.6mL CB0247M-A，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，常温离心5min，弃上清，留沉淀。
2.沉淀中加入0.3mL蒸馏水，放入沸水浴中糊化15min（盖紧，以防止水分散失）。
3.冷却后，加入0.6mL CB0247M-B，放入沸水浴中提取15min，振荡3-5次。
4.冷却后，8000g，常温离心10min，取上清液待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2.调节水浴锅至95度。
3.标准品的制备：将10mg/mL标准液进行稀释得到0.4、0.2、0.1、0.05、0.04、0.03、0.02mg/mL标准溶液备用。
4.工作液的配制：临用前取1瓶CB0247M-C加入2.625mL蒸馏水后，缓慢加入14.875mL浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用；用不完的试剂4℃保存一周；（注意：加试剂顺序不要反了！）
5.标准品测定：取50μL标准溶液（蒸馏水做空白）和250μL工作液至EP管中，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中，在620nm波长下测定吸光度值A标准及A空白，计算ΔA标准=A标准-A空白（标准曲线和空白管只需做1-2次）。
6.样本测定：取50μL样本和250μL工作液至EP管中，95度水浴10 min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，在620 nm 波长下记录测定吸光度值A，计算ΔA=A测定-A空白

四、淀粉含量计算：
1.标准曲线绘制：根据标准管的浓度(x，mg/mL)和吸光度ΔA标准(y，ΔA标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA代入方程得到x(mg/mL)
2.淀粉含量计算：
淀粉含量 (mg/g 鲜重) =淀粉含量(mg/g 质量)=x×V提取÷W÷1.11×F=0.811x÷W×F
注：W：样本质量，g；V提取：提取后体积，0.9mL；F：样本稀释倍数；1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为淀粉含量的常数，即 111μg 葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于 100μg 淀粉用蒽酮试剂显示的颜色。

1.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.由于工作液具有强腐蚀性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。