SP Assay Kit (Microanalysis)

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸，并在6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原NADP⁺产生NADPH，使340nm 下吸光值增加。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、样本的前处理：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0248M-ES体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL CB0248M-ES）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：CB0248M-ES体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL CB0248M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒， 总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

三、测定步骤：
1.酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm；
2.工作液的配制：临用前将CB0248M-A、CB0248M-B、CB0248M-C按照每个样本170μL:10μL:10μL 的比例混合，临用前配制，半小时内使用。
3.在96孔板中加入10μL样本和190μL工作液，立即混匀，记录340nm处1min时的吸光值A1和6min时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

四、SP活力单位的计算：
1.按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SP (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr)÷T = 1286×ΔA÷Cpr
2.按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SP (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 1286×ΔA÷W
3.按样细胞数量计算
单位定义：每万个细胞每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SP (nmol/min/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T =2.572×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液(CB0248M-ES)体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细胞数量，500万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。