Pyruvate Decarboxylase Assay Kit (Microanalysis)

PDC 催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH 还原乙醛生 成乙醇和 NAD⁺；NADH 在 340 nm 有吸收峰，而 NAD⁺没有；通过测定 340 nm 光吸收下降速率，来计算 PDC 活性。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织样本的制备：
按照组织质量（g）：CB0192M-A体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组 织，加入 1mL CB0192M-A）进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
2.细菌或细胞样本的制备：
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 200 万细菌或细 胞加入 400μL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 200W，工作 3s，间歇 10s，工作 35 次），16000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2.CB0192M-B在 25℃水浴锅中预热 30 min。
3.在微量石英比色皿/96 孔板中按顺序加入下列试剂：

四、PDC 活性计算：

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算：
活性单位定义：25℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1μmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。
PDC (μmol/min/mg prot) = {[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁶}÷(Cpr×V样)÷T=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr
2.按照样本质量计算：
活性单位定义：25℃中，每克组织每分钟催化 1μmol NADH氧化为 1 个酶活单位。
PDC (μmol/min/g) = {[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁶}÷(W×V样÷V样总) ÷T=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W
3.按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中，每 10⁴ 个细胞每分钟催化 1μmol NADH氧化为 1 个酶活单位。
PDC (μmol/min/10⁴ cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V总×10⁶}÷(细胞数量×V样÷V样总) ÷T=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷细胞数量
4.按血清(浆)体积计算
活性单位定义：25℃中，每毫升血清(浆)每分钟催化 1μmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。
PDC (μmol/min /mL) = {[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁶}÷V样÷T =1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)
注： ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 总：反应体系总体积，0.2mL=2×10^-4 L，V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；V样总：提取液体积，1 mL；Cpr：蛋白浓度(mg/mL)，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量试剂盒；W：样品质量；T：反应时间，1 min。

b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下：
1.按照蛋白浓度计算：
活性单位定义：25℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1μmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。
PDC (μmol/min/mg prot) = {[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁶}÷(Cpr×V样) ÷T =3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr
2.按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中，每克组织每分钟催化 1μmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。
PDC (μmol/min/g) = {[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷(W×V样÷V样总) ÷T =3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W
3.按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中，每 10⁴ 个细胞每分钟催化 1μmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。
PDC (μmol/min/10⁴ cell) = {[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×106}÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷细胞数量
4.按血清(浆)体积计算
活性单位定义：25℃中，每毫升血清(浆)每分钟催化 1μmol NADH 氧化为 1 个酶活单位。
PDC (μmol/min/mL) = {[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 总×10⁶}÷V样÷T =3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]
注： ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V 总：反应体系总体积，0.2mL=2×10^-4 L，V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；V样总：提取液体积，1 mL；Cpr：蛋白浓度(mg/mL)；W ：样品质量；T：反应时间，1 min。

1.配制好的混合液 3 天内使用完。
2.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。