Protein Carbonyl Assay Kit (Microanalysis)

蛋白质羰基含量测定试剂盒为各种生物样品中羰基含量的测定提供了一种简单、直接的方法。羰基含量是通过蛋白质羰基与2,4-二硝基苯肼（DNPH）衍生形成稳定的二硝基苯肼（DNP）腙加合物来测定的，该加合物可在370nm处用分光光度法检测，与存在的羰基成比例。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、无水乙醇、乙酸乙酯。

二、样品处理：
1.组织样品的制备：
按照组织质量（g）：CB0195M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0195M-ES）进行冰浴匀浆，于 4℃，4000g 离心 10min，取上清，加入 0.1mL CB0195M-A，室温放置 10min，4℃，10000g 离心 10min，取上清待测。
2.细菌、细胞样品的制备：
按照细胞数量（10⁴个）：CB0195M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0195M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体样本：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 370nm，CB0195M-F调零点。
2.在 EP 管中按顺序加入下列试剂：

注：对照管只要做一次即可。

四、蛋白质羰基含量计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照样本蛋白浓度计算
蛋白质羰基含量 (μmol/mg prot) = [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(V样×Cpr) = 0.227×ΔA370÷Cpr
2.按照样本重量计算
蛋白质羰基含量 (μmol/g) = [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(W ×V样÷V样总) = 0.227×ΔA370÷W
3.按照细胞数量计算
蛋白质羰基含量 (μmol/10⁴ cell) = [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(细胞数量×V样÷V样总)=0.227×ΔA370÷细胞数量
4.按照液体体积计算
蛋白质羰基含量 (μmol/mL) = [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷V样=0.227×ΔA370
V反总：反应体系总体积，0.3 mL；ε：羰基毫摩尔消光系数，22 L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.06 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，W：样本质量，g。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1.按照样本蛋白浓度计算
蛋白质羰基含量 (μmol/mg prot) = [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(V样×Cpr) = 0.454×ΔA370÷Cpr
2.按照样本重量计算
蛋白质羰基含量 (μmol/g) = [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(W ×V样÷V样总) = 0.454×ΔA370÷W
3.按照细胞数量计算
蛋白质羰基含量 (μmol/10⁴ cell) = [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷(细胞数量×V样÷V样总)=0.454×ΔA370÷细胞数量
4.按照液体体积计算
蛋白质羰基含量 (μmol/mL) = [ΔA370×V反总÷(ε×d)]÷V样 = 0.454×ΔA370
5.V反总：反应体系总体积，0.3 mL；ε：羰基毫摩尔消光系数，22 L/mmol/cm；d：96 孔板光 径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.06 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本 蛋白质浓度，mg/mL，W：样本质量，g。

1.CB0195M-A使用前根据要测定的样品数现配，配置好后 4℃保存，若变为黑色，则不能使用。
2.CB0195M-B见光易分解，反应需严格避光。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.本试剂盒中试剂含有有机溶剂，为了您的安全和健康，请穿实验服、口罩并戴一次性手套操作。