Proline Assay Kit (Spectrophotometry)

用磺基水杨酸（SA）提取 Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯萃取后，在 520nm 测定吸光度。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1ml 石英比色皿、水浴锅、天平、烘箱、玻璃管、离心机、可调式移液枪、冰乙酸 35mL、研钵、冰和蒸馏水。

二、样品准备：
1.细菌、细胞样品的制备：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0137S-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0137S-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；之后置沸水浴振荡提取 10min；10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。
2.组织样品的制备：
组织：按照组织质量（g）：CB0137S-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加 入 1mL CB0137S-ES），进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取 10min；10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。
3.血清（浆）样品的制备：
按照血清（浆）体积（mL）：CB0137S-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL 血清（浆）加入 0.9mL CB0137S-ES），充分混匀，之后置沸水浴振荡提取 10 分钟，10000g，常温离心 10 min，取上清，冷却后待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 520nm，蒸馏水调零。
2.标准品的处理：临用前加入1 mL蒸馏水，配成 10 mg/mL 标准品，再将标准品用蒸馏水稀释为50、25、10、5、2.5μg/mL备用。
3.样本测定：

四、Pro 含量计算：
1 以标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b，将ΔA代入方程得到x (μg/mL)。
2 按照血清（浆）体积计算
Pro 含量 (μg/mL) = 10×x
3 按照样本质量计算
Pro 含量 (µg/g 鲜重) =x×V提÷W=x÷W
4 按照细菌或细胞密度计算
Pro 含量(μg/10⁴ cell) = x×V提÷细胞/细菌数量=x÷细胞/细菌数量
注： V提：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；细胞/细菌数量：以10⁴为单位，万个；10：血清稀释倍数，(0.1+0.9)÷0.1=10。

1.提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。
2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本或者稀释样本后再进行测定。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。