PLA2 Assay Kit (Microanalysis)

磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱（HEPC）产生游离巯基，与DTNB反应生成黄色物质，在412nm处有特征吸收峰。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、超速冷冻离心机、研钵。

二、酶液提取
1.组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0287M-ES）加入CB0287M-ES，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL CB0287M-A。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0287M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL CB0287M-A。
3.血清：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30 min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（在微量石英比色皿/96 孔板中加入）：

四、PLA2酶活计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性 (nmol/min/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 73.53×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算：
酶活性定义：每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性 (nmol/min /g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T = 73.53×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性 (nmol/min/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 73.53×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性 (nmol/min/mL) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 73.53×ΔA
注：ε：TNB消光系数，13600L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性 (nmol/min/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 147.06×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算：
酶活性定义：每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性 (nmol/min/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T = 147.06×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算：
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性 (nmol/min/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 147.06×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性 (nmol/min/mL) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 147.06×ΔA
注：ε：TNB消光系数，13600L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。