Pepsin Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：CB0161V-A体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0161V-A）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min，调节波长到 580 nm，蒸馏水调零。
2.CB0161V-C和CB0161V-D置于 37℃水浴预热 30min。
3.在 EP 管中依次加入下列试剂：

注意：空白管和标准管只需要测定1-2次。

四、胃蛋白酶活力计算：
1.按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol酪氨酸为 1 个酶活单位。
胃蛋白酶活性 (U/mg prot) = C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T=11000×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

注： C标准品：标准品浓度，1 μ mol/mL=1000nmol/mL；稀释倍数：(100+500+500)÷100=11；Cpr：粗酶液蛋白质浓度(mg/mL)，需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积(mL)，100μL=0.1 mL；T：催化反应时间(min)，10min。
2.按照样本质量计算
活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1nmol酪氨酸为 1 个酶活单位。
胃蛋白酶活性 (U/g) = C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T=11000×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
注： C标准品：标准品浓度，1 μ mol/mL=1000nmol/mL；稀释倍数：(100+500+500)÷100=11；W：组织质量(g)；V1：加入反应体系中粗酶液体积(mL)，100μL= 0.1 mL；V2：粗酶液总体积(mL)，1mL；T：催化反应时间(min)，10min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.CB0161V-C、CB0161V-D、CB0161V-E临用前配制，配制好用不完的试剂 4℃可保存一周。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。