PE Assay Kit (NaOH Titration)

果胶酯酶催化水解果胶分子释放H⁺，使反应体系的pH下降，用碱液维持体系的pH始终保持在7.8（酚酞指示剂维持在粉红色），通过碱消耗的NaOH量反映果胶酯酶的活性。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
天平、研钵、离心机、烘箱

二、样品处理
称取1g组织样品，加入2mL提取液（CB0299-ES）冰浴充分研磨（研钵提前-20℃预冷10min，提取液提前4℃预冷。可以根据客户自己的样本特殊性，自行按比例调整），12000g、4℃离心15min，取全部上清液待测。

三、测定步骤：
1.CB0299-A于37℃烘箱保温10min，样本全部提取上清（约2mL）分别转移至15 mL离心管或者试管中。
2.向样本上清中分别加入50μL CB0299-B，混匀；然后每管加入8 mL CB0299-A混匀，并用CB0299-D调节pH至7.8（粉红色）。
3.将上述各离心管或试管放置37℃烘箱60分钟，每隔20分钟用试剂D调节pH，使pH维持在7.8（粉红色）；记录所消耗的CB0299-D的体积V（mL）。

四、计算公式：
酶活定义：每g组织每分钟消耗1μmol NaOH定义为一个酶活单位U。
PE活性 (U/g) = 20VF / (TW) = VF / (3W)
注：V：滴定所消耗的CB0299-D的量，mL；T：反应时间，60 min；F：样品稀释倍数；W：样品质量，g。

1.CB0299-A提前预热，保证酶反应速率。
2.实验前先做预实验，如果酶活力太高，适当调整样本稀释倍数，如将样品稀释2-5倍进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。