OAT Assay Kit (Microanalysis)

鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和NADH作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸（P5C），同时产生NAD，通过检测340nm处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、低温离心机、研钵。

二、酶液提取：
1.组织：按照质量（g）：CB0228M-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0228M-ES）加入CB0228M-ES，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：CB0228M-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0228M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
3.液体样本：直接检测。

三、测定步骤：
1.酶标仪预热30min，调节波长至340nm。
2.将配好的CB0228M-B、CB0228M-C、CB0228M-D 37℃预热5min。（注意：粉剂试剂需要自行配制）
3.样本测定（在96孔板中加入下列试剂）：

四、OAT酶活性计算：

用96孔板测定的计算公式如下
1.按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
OAT (nmol/min /mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T = 321.54×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
OAT (nmol/min /g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T = 321.54×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活单位定义：每10⁴个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
OAT (nmol/min /10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T = 321.54×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
OAT (nmol/min /mL) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 321.54×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入CB0228M-ES体积，1mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。