Nitric Oxide Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

一氧化氮在体内或水溶液中极易氧化生成 NO₂ ^- ，在酸性条件下，NO₂^- 与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在 550nm 处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算 NO 含量。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。

二、样品处理：
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10 ⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 15min，取上清置于冰上待测。
3.体液和培养液等其它液态样品：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 550nm。
2.标准液的制备：将标准品用蒸馏水稀释至0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL 标准液。
3.在EP管中依次加入下列试剂：

注意：空白管只需做1-2次。

四、一氧化氮含量计算公式：
1.标准曲线的绘制： 以各标准溶液浓度为x轴，以ΔA标准为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b；将ΔA测定带入方程求x值。
2.NO含量的计算：
(1)按样本蛋白浓度计算
NO 含量 (μmoL/mg) =x×V样÷(V样×Cpr) =x÷Cpr
(2)按样本质量计算
NO 含量 (μmoL/ g prot) =x×V样÷(W×V样÷V样总) =x÷W

(3)按样本细胞数量计算
NO含量(μmol/10 ⁴ cell)=x×V样÷(V样×细胞数量÷V样总) =x÷细胞数量
(4)按液体体积计算
NO含量(μmol/mL)= x×V样÷V样= x
V样：加入样本体积；V样总：加入提取液体积；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细胞数量：以10⁴ 为单位，万个。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.尽量使用新鲜样品进行检测，且操作时请做好防护措施。
3.若检测出得 OD 值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释，并在计算公式中除以浓缩倍数或者乘以稀释倍数。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。