Nile Red Staining Solution

1. 脂滴标记灵敏度高。
2. 细胞毒性低，适用于活细胞标记研究。
3. 适用性广，既能用于活细胞成像，又能用于固定细胞和组织染色。
4. 操作简便，检测快速。

细胞内脂滴定位、脂质代谢过程检测、降脂药物筛选、肥胖模型实验、脂质体药物载体示踪。

用适宜稀释液（无血清培养基或PBS）将Nile Red储备液稀释为浓度为0.2-1μM的染色工作液。具体的工作液浓度应视实验情况调整。

1. Nile Red染色后用流式细胞仪检测：
   （1）细胞样本制备：
   a. 悬浮细胞：将细胞以1000 rpm离心5 min，弃培养基，加入PBS重悬，1000 rpm离心5 min，弃上清。
   b. 贴壁细胞：吸除培养基，PBS洗涤，用胰蛋白酶消化并收集细胞，加入PBS重悬，1000 rpm离心5 min，弃上清。
   （2）（选做）加入4%多聚甲醛，室温固定10-15 min。固定结束后以1000 rpm离心5 min，弃上清。加PBS重悬细胞，1000 rpm离心5 min，弃上清。
   （3）加入适量Nile Red工作液，室温避光孵育5-15 min。孵育结束后以1000 rpm离心5 min，弃上清。
   （4）加入PBS重悬细胞，1000 rpm离心5 min，弃上清。
   （5）加入PBS重悬细胞，然后使用流式细胞仪检测细胞染色情况。可根据实验需求，设置适合的激发波长和发射波长以检测荧光。若观察红色荧光，建议设置Ex=552 nm，Em=636 nm左右；若观察绿色荧光，建议设置Ex=485 nm，Em=535 nm左右。
2. Nile Red染色后使用荧光显微镜检测：
   （1）将贴壁细胞接种在无菌细胞爬片上培养。
   （2）待细胞培养完成，吸去旧培养基，用PBS洗涤细胞2次。
   （3）（选做）加入4%多聚甲醛，室温固定10-15 min。固定结束后用PBS洗涤1-2次。
   （4）加入适量Nile Red工作液，室温避光孵育5-15 min。孵育结束后用PBS洗涤1-2次。
   （5）加入适量PBS覆盖住细胞，在荧光显微镜下观察染色结果。可根据实验需求，设置适合的激发波长和发射波长以检测荧光。若观察红色荧光，建议设置Ex=552 nm，Em=636 nm左右；若观察绿色荧光，建议设置Ex=485 nm，Em=535 nm左右。

-20ºC避光保存，一年有效。

1. Nile Red的发射光谱范围广，建议避免与其他荧光颜料同时进行染色，以防干扰实验结果。
2. Nile Red属于荧光染料，光照易导致荧光淬灭，操作过程应注意避光。
3. 由于样本类型和实验环境的不同均会影响染色效率，建议通过预实验来优化工作液浓度和染色时间。
4. 本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
5. 为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。