Mitochondrial Isolation Kit for Mammalian Cells and Tissues

本试剂盒采用专门的试剂温和匀浆组织和细胞，再用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体（如果需要线粒体酶，利用专门试剂，配合超声波破碎线粒体，可以得到保持活性的线粒体酶，用于线粒体酶活性检测）。
应用：提取出的线粒体可应用于SDS-PAGE，immunoblottings, ELISA, IP, 膜蛋白结构分析，2-D，酶活性检测，也可作为提取线粒体DNA，RNA等分子生物学研究的起始原料及其他应用。

50T规格的产品组成及保存条件：

一、自备用品：
超声波破碎仪、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

二、提取步骤
1.准确称取约 0.1g 组织或收集约 500 万细胞，加入 1mL CB0180-A和 10μL CB0180-D，用冰浴匀浆器或研钵研磨。
2.4℃ 600 g 离心 5min。
3.弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，4℃ 11000 g 离心 10min。
4.上清液即胞浆提取物，可用于研究线粒体蛋白向胞浆的释放。
5.沉淀即为完整线粒体，含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能，可用于线粒体的生理功能等方面的研究。
6.如果要获得去除线粒体的细胞浆蛋白，应在本步骤中收集上清，并且在收集上清时注意勿触及沉淀，随后把收集的上清 12000g 4℃离心 10min，上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。
7.如果要获得线粒体酶，在沉淀中加入 200μL CB0180-B和 2μL CB0180-D，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体酶活性测定。
8. 如果要获得线粒体蛋白，在沉淀中加入 200μL CB0180-C和 2μL CB0180-D，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体蛋白浓度测定。

1.分离线粒体和提取线粒体蛋白质的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷。
2.通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 600g 和 11,000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用 1000g 和 3500g。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。