Mitochondrial Citric Acid Assay Kit (Spectrophotometry)

酸性条件下，柠檬酸还原 Cr⁶⁺生成 Cr³⁺，在 545nm 处有特征吸收峰；通过测定 545nm 吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。

25T/24S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水

二、样本的前处理：
按照组织质量（g）：CB0239S-A体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0239S-A）进行冰浴匀浆，600g/min，4℃离心 5min；取上清至另一EP管中，11000g，4℃离心 10min，弃上清（此上清液可用于细胞质CA 含量测定）；向沉淀中加CB0239S-B 200μl，以及CB0239S-C 2μl，充分悬浮溶解，11000g，4℃离心 10min，取上清液，待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 545 nm，蒸馏水调零。
2.将CB0239S-A置于 30℃水浴中预热 30min。
3.在EP管或1 mL 玻璃比色皿中加入下列试剂：

四、柠檬酸含量计算公式

1.按组织质量计算

柠檬酸含量 (μmol/g) = [C_标准液 × (A_测定管 - A_空白管) ÷ (A_标准管 - A_空白管)] × V_总 ÷ W = 0.25 × (A_测定管 - A_空白管) ÷ (A_标准管 - A_空白管) ÷ W

注：C_标准液：250 μmol/L；V_总：上清液体积，1.0 mL = 0.001 L；W：样品质量，g。

2.按蛋白含量计算

柠檬酸含量 (μmol/mg prot) = [C_标准液 × (A_测定管 - A_空白管) ÷ (A_标准管 - A_空白管)] ÷ C_pr = 0.25 × (A_测定管 - A_空白管) ÷ (A_标准管 - A_空白管) ÷ C_pr

注：C_标准液：250 μmol/L = 0.25 μmol/mL；C_pr：上清液蛋白质含量，mg/mL。

1.样品处理等过程均需要在冰上进行；
2.CB0239S-D需现配现用，配置好的一周内使用完；
3.CB0239S-E为易致癌物质，实验过程中，需佩戴手套，避免溅到皮肤上；
4.CB0239S-A不能用于蛋白含量测定，如需测定蛋白含量，需另取组织；
5.若反应 30min 后有明显的黑色小颗粒，属于正常现象，需将样本稀释后再测。
6.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。