Malondialdehyde Assay Kit (Microanalysis)

MDA 与硫代巴比妥酸 (thiobarbituric acid，TBA) 缩合，生成红色产物，在 532nm 有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定 600nm 下的吸光度，利用 532nm 与 600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

二、MDA提取液：
1.细菌、细胞样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0094M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0094M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织样品的制备：按照组织质量（g）：CB0094M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL CB0094M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.吸取 0.3mL CB0094M-A于1.5mL 离心管中，再加入 0.1mL 样本, 混匀。
2.95℃水浴中保温 30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心 10min。
3.吸取 200μL 上清液于微量玻璃比色皿/96 孔板中，测定 532nm 和 600nm 处的吸光度，记为 A532 和 A600，ΔA= A532-A600。

四、MDA 含量计算：

a. 用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下
1.血清(浆)中 MDA 含量的计算：
MDA 含量 (nmol/ mL) = [ ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样 = 25.8×ΔA
2.细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算：
(1)按照蛋白浓度计算
MDA含量 (nmol/ mg prot) = [ ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(Cpr×V样) = 25.8× ΔA ÷Cpr
(2)按照样品质量计算
MDA含量 (nmol/g 鲜重) = [ ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总) = 25.8×ΔA ÷W
(3)按照细菌或细胞密度计算：
MDA含量 (nmol/10⁴) = [ ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总) = 0.0516×ΔA
注： V反总：反应体系总体积， 4×10^-4 L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1.血清(浆)中 MDA 含量的计算：
MDA 含量 (nmol/ mL) = [ ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样 = 51.6×ΔA
2.细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算：
(1)按照蛋白浓度计算
MDA 含量 (nmol/ mg prot) = [ ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(Cpr×V样) = 51.6×ΔA÷Cpr
(2)按照样品质量计算
MDA含量 (nmol/g 鲜重) = [ ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V样÷V样总) = 51.6×ΔA ÷W
(3)按照细菌或细胞密度计算：
MDA 含量 (nmol/10⁴) = [ ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V样÷V样总) = 0.1032×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，4×10^-4 L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×10³ L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。