Lipoprotein lipase Assay Kit (Microanalysis)

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰、丙酮和蒸馏水。

二、粗酶提取：
1.组织：按照质量（g）：CB0093M-A体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入1mL CB0093M-A）加入CB0093M-A，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：CB0093M-A体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0093M-A）加入CB0093M-A，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清待测。
3.血清：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 400 nm，蒸馏水调零。
2.将5μmol/mL标准液用CB0093M-A稀释16倍至0.3125μmol/mL的标准溶液备用。
3.在1.5mL 离心管中依次加入下列试剂：

四、LPL 活性计算公式：
1.血清（浆）LPL活力计算：
单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫升血清每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。 LPL(U/mL)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准
2.组织、细菌或细胞中LPL活力计算：
(1)按样本质量计算：
单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL(U/g 质量)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷W
(2)按样本蛋白浓度计算：
单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL(U/mg prot)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷(V提取×Cpr)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷Cpr
(3)按细菌或细胞数量计算：
单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每10⁴个细胞每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL(U/10⁴ cell)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷500÷T×1000=0.0625×ΔA÷ΔA标准
C标准：标准溶液浓度，0.3125μmol/mL；V提取：加入CB0093M-A体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol。

1.CB0093M-C加入混匀后静置两分钟立即测定，否则影响吸光值。
2.测定管加入CB0093M-B后变浑浊为正常现象。
3.吸光值过高或者测定结果不稳定，则将粗酶液进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。