Lacate Dehydrogenase Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

LDH 催化 NAD⁺ 氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。

50T/24S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、水浴锅、天平、烘箱、玻璃管、离心机、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织样品的制备： 按照组织质量（g）：CB0091S-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml CB0091S-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、细胞样品的制备： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0091S-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml CB0091S-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品： 直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
2.制备标准品：取适量标准品原液，然后用蒸馏水进行倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL做标准曲线。
3.在 EP 管中加入下列试剂：

四、乳酸脱氢酶活力计算：
1.标准曲线绘制：以标准液浓度为x轴，A标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA测定代入公式得到x(μmol/mL)。
2.血清（浆）LDH 活力的计算：
单位的定义：每 ml 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH (U/mL) =x ×V样÷V样÷T×10³=66.67x
3.细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH (U/mg prot) = x ×V样÷(Cpr×V样)÷T×10³= 66.67× x÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH (U/g 鲜重) = x×V样÷(W÷V样总×V样)÷T×10³ = 66.67× x÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH (U/10⁴ cell) = x×V样÷(500÷V样总×V样)÷T×10³ = 0.133x
注：V样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液的体积，1 ml；T：反应时间，15 min； Cpr：蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；10³：1μmol/mL=10³ nmol/mL。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。