Isocitrate Dehydrogenase Cytoplasmic(ICDHc) Activity Assay Kit (Microanalysis)

异柠檬酸脱氢酶活性测定试剂盒提供了一种简单、直接的方法，用于测定各种样品中胞浆异柠檬酸脱氢酶 (ICDHc, Isocitrate dehydrogenase [NADP] cytoplasmic) 活性。利用 ICDHc 催化 NADP⁺ 还原成 NADPH 的反应，在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加，即可反映 ICDHc 活性。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水。

二、样本的前处理
1.细菌、细胞样品的制备：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0189M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0189M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织样品的制备：
按照组织质量（g）：CB0189M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0189M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2.将CB0189M-A置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴中预热 10min 左右。
3.工作液配制：将CB0189M-A、CB0189M-B、CB0189M-C按 85：1：1 的比例混合，现配现用。
4.按顺序加入下列试剂：

3.实验时，试剂B、试剂C和样本在冰上放置，以免变性和失活；工作液 37℃水浴放置。

四、ICDHc 活力单位的计算：

a. 按微量石英比色皿计算：
1.血清（浆）ICDHc 活力的计算：
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(U/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷V样本÷T=1608×ΔA
2.组织、细菌或细胞中 ICDHc 活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T =1608×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W÷V提取×V样本) ÷T=1608×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(U/10⁴ Cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V样本×500)÷T=3.2×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

b. 按96 孔板计算：
将上述公式中光径 d-96 孔板光径改为 0.5cm。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。