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常见问题解答
Hydrogen Peroxide Assay Kit (Microanalysis)
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产品编号 CB0089M
别名 过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒（微量法）
过氧化氢（H2O2）是生物体内最常见的活性氧分子，主要由超氧化物歧化酶（SOD）和黄嘌呤氧化酶（XOD）等催化产生，由过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）等催化降解。H2O2 不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2 可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面 H2O2 也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100 T | ¥ 473 | 4-6日内发货 |
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，不能被用于人体，我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途，不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
检测原理
H2O2 与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在 415nm 有特征吸收。
产品规格
100T/96S规格的产品组成及保存条件：
| 编号 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| CB0089M-A (Acetone) | 100mL×1 瓶 | 自备，4℃保存 |
| CB0089M-B | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存；临用前加入3mL浓盐酸溶解备用；用不完的试剂4℃保存(溶解时间较长，约30min，若有不溶物质，则离心取上清使用) |
| CB0089M-C | 10mL×1 瓶 | 4℃保存 |
| CB0089M-D | 30mL×1 瓶 | 4℃保存 |
| CB0089M-Standard (1mmol/mL) | 1mL×1 支 | 4℃保存 |
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
操作说明
一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、丙酮、浓盐酸、冰和蒸馏水。
二、H2O2提取：
1.细菌、细胞样品的制备：
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：CB0089M-A体积（mL）为 500:1 的比例（按照500 万细菌或细胞加入 1mL CB0089M-A），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织样品的制备：
按照组织质量（g）：CB0089M-A体积（mL）为 1: 5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0089M-A），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：按照每 0.1mL 血清（浆）加入 0.9mL CB0089M-A的比例充分混匀，8000g 4℃离心10min，取全部上清液（注意吸取干净），置冰上待测。
三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 415nm，蒸馏水调零。
2.将CB0089M-B、CB0089M-C和CB0089M-D置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴10min以上。
3.如果用96孔板将则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为2μmol/mL的标准溶液，用微量玻璃比色皿则用丙酮将 1mmol/mL标准液稀释为1μmol/mL的标准溶液。
4.在 EP 管中按顺序加入下列试剂：
| 试剂名称 | 对照管 （μL） | 测定管 （μL） |
标准管 |
|---|---|---|---|
| 样本 | 250 | ||
| 稀释后的标准溶液 | 250 | ||
| CB0089M-A | 250 | ||
| CB0089M-B | 25 | 25 |
25 |
| CB0089M-C | 50 | 50 |
50 |
| 4000g，常温离心 10min，弃上清，留沉淀（可用丙酮清洗 3-5 次先洗去植物色素） | |||
| CB0089M-D | 250 | 250 |
250 |
| 溶解沉淀后，室温静置 5min，取200μL转移至微量玻璃比色皿或96孔板中，然后测定415nm 处吸光值 A。计算∆A测定=A测定管-A对照管，∆A标准=A标准管-A对照管。 |
|||
注：对照管只要做1-2次即可。
四、H2O2含量计算公式：
a. 按96孔板计算:
1.血清(浆)中H2O2含量计算：
H2O2含量 (μmol/mL) =∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×10=20×∆A测定÷∆A标准
2.细菌、细胞或动物组织中 H2O2含量计算：
(1)按照蛋白浓度计算
H2O2含量 (μmol/mg prot) =∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×V样本÷(Cpr×V样本)=2×∆A测定÷∆A标准÷Cpr
(2)按照样本鲜重计算
H2O2含量 (μmol/g 鲜重) =∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×V样本÷(V样本÷V提取×W)=2×∆A测定÷∆A标准÷W
(3)按照细菌或细胞个数计算：
H2O2含量 (μmol/104) =∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×V样本÷(500×V样本÷V提取) =0.004×∆A测定÷∆A标准
注：500：细胞/细菌个数，以万计；C标液：H2O2标准溶液浓度，2μmol/mL；V样本：加入的样本体积，0.25 mL；W：组织质量，g；V提取：提取过程中所用体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； 10：血清稀释倍数。
b. 按微量玻璃比色皿计算:
将公式中的C标液-2μmol/mL改为C标液-1μmol/mL进行计算即可。
注意事项
1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.由于丙酮易挥发，丙酮必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。
3.本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。
4.如果样本吸光值大于1.1，建议将样本用CB0089M-A稀释后进行测定。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.本试剂盒中试剂的挥发性较高，为了您的安全和健康，请穿实验服、口罩并戴一次性手套操作。
引用文献
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