Glycogen Assay Kit (Microanalysis)

蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。

二、糖原提取：
1.细胞或细菌：收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入 0.75mL CB0087M-ES超声波破碎细菌或细胞（功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；转移至 10mL 试管中，沸水浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔 5min 振摇试管 1 次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到 5ml，混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。
2.组织：称取 0.1~0.2g 样品，加入 0.75ml CB0087M-ES充分匀浆；转移至10ml 试管中；95℃水浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔 5min 振摇试管 1 次，使充分混匀；待组织全部溶解后，取出试管冷却后，用蒸馏水定容到 5ml，混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。

三、测定操作过程：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。
2.调节水浴锅至100℃。
3.CB0087M-A工作液的配制：在CB0087M-A中加入1mL 蒸馏水，即为10 mg/mL葡萄糖溶液，再用蒸馏水稀释为0.1 mg/mL 的溶液备用，现用现配。
4.CB0087M-B工作液的配制：在CB0087M-B中加入6mL 蒸馏水，缓慢倒入24mL浓硫酸，充分溶解混匀后使用；用不完的试剂 4℃保存一周。
5.加样表（在 EP 管中反应）：

注意：
1.空白管和标准管只要测1-2次。
2.如果 A3-A1 大于 2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。

四、计算公式：
1.按照样本质量计算
糖原 (mg/g鲜重) = (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)÷1.11= 0.45×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
2.按照样本蛋白浓度计算
糖原 (mg/mg prot) = (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)÷1.11=0.09×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr
3、按照细菌或细胞数量计算
糖原(mg/10⁴ cell)= (C标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(细菌或细胞数量×V1÷V2) ÷1.11 = 0.45×(A3-A1)÷(A2-A1)÷细菌或细胞数量
计算公式中：1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即 111μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100μg糖原用蒽酮所试剂显示的颜色；C 标准管：标准管浓度，0.1mg/mL；V1：加入反应体系中糖原提取液体积，0.06mL；V2：加入提取液体积，5mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；细菌或细胞数量：以10⁴为单位，万个。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。