Glutamine Synthetase Assay Kit (Microanalysis)

谷氨酰胺合成酶 (GS) 在 ATP 和 Mg²⁺存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为 γ─ 谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在 540nm 处有最大吸收峰。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0121M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0121M-ES，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2.样本测定，在 EP 管中加入下列试剂：

混匀，静置 10min 后，8000g，常温离心 10min，取200μL上清液至微量石英比色皿或 96孔板中，测定 540nm 处的吸光值 A。△A=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

四、GS活力单位的计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.血清(浆)GS 活性
单位定义：每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每 min 使 540 下吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS (U/mL) = ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T = 19×ΔA
2.组织、细菌或细胞 GS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm下吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷0.01÷T = 19×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm下吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T = 19×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm下吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS (U/10⁴ cell) = ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T = 0.038×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，0.4mL；V样：加入样本体积，0.07mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量(g)；500：细菌或细胞总数，500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1.血清(浆)GS 活性
单位定义：每 mL 血清(浆)在每 mL 反应体系中每 min 使 540下吸光值变化 0.005 定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS (U/mL) = ΔA×V反总÷V样÷0.005÷T = 38×ΔA
2.组织、细菌或细胞 GS 活性
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm下吸光值变化 0.005 定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷0.005÷T = 38×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.005 定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS (U/g 鲜重) = ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T = 38×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.005定义为一个酶活力单位。
计算公式：GS (U/10⁴ cell) = ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T = 0.076×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，0.4mL； V样：加入样本体积，0.07mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量(g)；500：细菌或细胞总数，500 万。

1.CB0121M-A、CB0121M-B可能会有析出，可以重悬后使用，反应后取上清测定。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。