Glutamic-pyruvic Transaminase Assay Kit (Microanalysis)

GPT 催化丙氨酸和 α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入 2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在 505nm 读取吸光值并计算酶活力。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

二、样品制备：
1.细菌、细胞样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0123M-ES体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0123M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织样品的制备：
组织：按照组织质量（g）：CB0123M-ES体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0123M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。
2.标准曲线的稀释：将标准品用蒸馏水稀释至1μmol/mL、0.8μmol/mL、0.4μmol/mL、0.2μmol/mL、0.1μmol/mL、0.05μmol/mL、0μmol/mL。
3.在96孔板中按下表加入试剂：

四、计算公式：
1.标准曲线的绘制：
以各标准溶液浓度为x轴，以A505为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b；将(A测定管-A对照管)带入方程求x值。
2.GPT活性计算：
(1)按样本质量计算：
单位定义：每小时每g样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。
GPT(U/g 质量)=x×(V样本+CB0123M-A)÷(W×V样本÷V样总)÷T=12x÷W
(2)按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。
GPT(U/mg prot)=x×(V样本+CB0123M-A)÷(Cpr×V样本)÷T=12x÷Cpr
(3)按血清(浆)体积计算：
单位定义：每小时每mL血清(浆)样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。
GPT(U/mL)=x×(V样本+CB0123M-A)÷V样本÷T=12x
(4)按细胞或细菌数量计算：
单位定义：每小时每10⁴个细胞或细菌催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。
GPT(U/10⁴ cell)=x×(V样本+CB0123M-A)÷(500×V样本÷V样总)÷T=0.024x
V样本：0.005mL；CB0123M-A：0.025mL；V样总：提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；T：反应时间，0.5h；500：细胞或细菌总数，500万。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。