Glucoamylase Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖，与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物，在540nm处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比，可测定计算得糖化酶的活力。

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、天平、低温离心机、恒温水浴锅。

二、酶液提取
1.组织：按照质量（g）：CB0235V-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0235V-ES）加入CB0235V-ES，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：CB0235V-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0235V-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2.标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 7、5、4、3、2、1mg/mL。
3.加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：

四、酶活性计算公式：
a.标准曲线的绘制：
根据标准管的浓度(x，mg/mL)和吸光度ΔA标(y，ΔA标)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测(y， ΔA测)带入公式计算样本浓度(x，mg/mL)。

b.酶活性计算：
1.按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：在40℃每毫克蛋白每小时产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/mg prot)=x×V样总÷(V样总×Cpr)÷T=3x÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：在40℃每克组织每小时产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/g 质量)= x×V样总÷ W÷T=3x÷W
3.按照液体体积计算
酶活性定义：在40℃每毫升液体每小时产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/mL)= x×V样÷V样÷T=3x
4.按照细胞数量计算
酶活性定义：在40℃每10⁴个细胞每小时产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
糖化酶活性(U/10⁴ cell)= x×V样总÷500÷T=0.006x
V样：反应体系中加入的样本体积，50μL=0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度， mg/mL，需自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间，20min=0.333h；500：细胞数量，500万。

1.灭活样本的制备建议将样本放在沸水浴中煮沸10min，以将酶彻底灭活。
2.测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用CB0235V-ES进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。