Gal LDH Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

Gal LDH 催化 L-半乳糖内酯还原细胞色素C (Cytochrome C, Cyt c)，还原型 Cyt c 在550nm 有吸收峰；测定还原型 Cyt c 增加速率，来计算 Gal LDH 活性。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：CB0182V-A体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0182V-A）进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 550nm，蒸馏水调零。
2.CB0182V-B在 25℃水浴锅中预热 30 min。
3.在1ml玻璃比色皿中依次加入下列试剂：

四、Gal LDH酶活性计算公式：
(1)按蛋白浓度计算
Gal LDH 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
Gal LDH (μmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T = 289×△A ÷Cpr
(2)按样本质量计算
Gal LDH 活性单位定义：25℃中每克样品每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
Gal LDH (μmol/min/g) = △A÷ε÷d×V反总×106÷(W×V样÷V样总)÷T = 289×△A ÷W
注： ε：还原型 Cyt c 摩尔消光系数，17.3×10³L/ mol/cm；d：比色皿光径(cm)，1cm；V反总：反应体系总体积，1mL=0.001 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V样：加入反应体系中上清液体 积，20μL=0.02mL；V样总：提取液体积，1 mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，T：反应时间，2min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.CB0182V-B，CB0182V-C配制好后 3 天内使用完。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。