FCR Assay Kit (Microanalysis)

FCR催化Fe3+还原为Fe2+，Fe2+和ferrozine反应显色，在562nm下有特征吸光值。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：水（mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
三、测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至562nm，蒸馏水调零。
2. 工作液配制：将CB0073M-A:B:C以1:1:1的比例混合。临用前配制，用多少配多少。
3. 样本测定：在微量石英比色皿/96孔板中加入下列试剂：

四、FCR活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 8.0014x + 0.0011，R² = 0.9997。

1. 按样本质量计算：

单位定义：每g样本每分钟产生1nmol Fe²⁺-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR (U/g 鲜重) = (△A-0.0011)÷ 8.0014×1000×V标÷(V 样÷V 样总×W)÷T = 4.166×(△A-0.0011)÷W
2. 按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每mg蛋白每分钟产生1nmol Fe²⁺-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR (U/mg prot) =( △A-0.0011)÷8.0014×1000×V标÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T = 4.166×(△A-0.0011)÷Cpr
注：V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，50μL；V标：加入标准品体积 ，50μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000，μmol到nmol的转换系数。
b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 4.0007x + 0.0011，R² = 0.9997；y，吸光度。

1. 按样本质量计算：

单位定义：每g样本每分钟产生1nmol Fe²⁺-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR (U/g 鲜重) = (△A-0.0011)÷4.0007×1000×V标÷(V 样÷V 样总×W)÷T = 8.331×(△A-0.0011)÷W
2. 按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每mg蛋白每分钟产生1nmol Fe²⁺-ferrozine定义为一个酶活力单位。
FCR (U/mg prot) = (△A-0.0011)÷4.0007×1000×V标÷(V 样÷V 样总×W)÷T = 8.331×(△A-0.0011)÷Cpr
注：V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，50μL；V标：加入标准品体积 ，50μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000，μmol到nmol的转换系数。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。