FBP Assay Kit (Microanalysis)

FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算FBP活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
二、样本的前处理：

1. 总FBP酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL CB0072M-ES1，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定。
2. 胞浆和叶绿体FBP酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL CB0072M-ES1），冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆FBP酶活性，取沉淀加1mL CB0072M-ES2，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定叶绿体中FBP酶活性。
3. 建议测定总FBP酶活性，按照步骤1提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP，则按照步骤2提取粗酶液。

三、测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 将CB0072M-A、B、C 置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热10分钟。
3. 操作表（在微量石英比色皿或96孔板中依次加入）：

四、FBP活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T = 321.5×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T = 321.5×ΔA÷W
注：V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b. 用96孔板测定的计算公式如下

1. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样×Cpr)÷T = 643×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T = 643×ΔA÷W
注：V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。