DiD Staining Solution

1. 远红荧光的组织穿透力强，适合深层组织或活体成像中的细胞追踪。
2. 细胞膜标记特异性强。
3. 细胞毒性低，可用于活细胞标记研究。
4. 适用性广，能用于多种样本类型。
5. 兼容性好，可与多重荧光探针共染。
6. 稳定性好，适合长时间标记。

活细胞标记与追踪、细胞谱系分析、活体成像中的细胞追踪、深部组织中细胞追踪、外泌体与囊泡追踪、药物载体评价。

用适宜稀释液（无血清培养基、PBS或HBSS）将DiD储备液稀释成染色工作液（1-30 µM）。具体的DiD工作液浓度应根据实验情况调整，一般用于细胞膜荧光标记的常用工作浓度为5-10 µM。

1. 悬浮活细胞染色
   （1）取对数生长期的悬浮细胞，1000 rpm室温离心5 min，弃上清。加PBS重悬，1000 rpm室温离心5 min，弃上清。
   （2）用37℃预热的培养基重悬，调整细胞密度至1×10⁶-5×10⁶cells/mL。
   （3）按细胞悬液体积的1/10倍加入DiD工作液，轻柔混匀，在37℃避光孵育5-20 min。
   （4）1000 rpm离心5 min，弃上清。用37℃预热的细胞培养基洗涤细胞2-3次，再重悬细胞。
   （5）用流式细胞仪检测，或将细胞悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片后，置于荧光显微镜下观察。Ex=644 nm，Em=663 nm左右。
2. 贴壁活细胞染色
   （1）吸去培养液，用37℃预热的细胞培养基洗涤细胞1次。
   （2）向细胞加入适量DiD染色工作液，需要使染液覆盖住所有细胞，于37℃避光染色5-20 min。
   （3）吸除DiD工作液，用37℃预热的细胞培养基洗涤2-3次，每次5 min。
   （4）加入37℃预热的细胞培养基覆盖住细胞，置于荧光显微镜下观察。Ex=644 nm，Em=663 nm左右。

-20℃避光保存，一年有效。

1. DiD染色液对活细胞染色时建议在37℃，对固定细胞或组织染色时可在常温。若需对细胞或组织固定，通常建议选用4%多聚甲醛作为固定液。
2. 悬浮细胞染色期间，建议每隔10 min轻晃离心管，防止细胞沉降聚集，影响染色均匀性。
3. 由于样本类型和实验环境的不同均会影响染色效率，建议通过预实验来优化工作液浓度和染色时间。
4. DiD在水溶液中稳定性差，长时间放置易聚集，荧光效率也会下降，建议DiD工作液现用现配。
5. 对数生长期细胞活性高、膜流动性好，建议选择对数生长期细胞进行染色，避免使用衰老或密度过高的细胞（膜功能受损会影响染料结合）。
6. 本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
7. DiD为脂溶性染料，可通过皮肤接触危害健康，为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。