DiamineOxidase Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在 500nm 处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算DAO活性。

50T/24S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：

组织：按照组织质量（g）：提取液CB0068V-ES体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0068V-ES）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌样品处理：

按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液CB0068V-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0068V-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：

1. 分光光度计预热 30min，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定，在 EP 管中按照下表操作：

四、酶活性计算公式：

1. 组织 DAO 活力的计算

（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO (U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(cpr×V 样本)÷T = 18×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO (U/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W÷V 提取×V 样本)÷T = 18×ΔA÷W
2. 血清（浆）DAO 活力的计算

单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO (U/mL) = ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V 样本÷T = 18×ΔA
3. 按细胞数量计算

单位的定义：每 10⁴个细胞在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO (U10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(500÷V 提取×V 样本)÷T = 0.036×ΔA
注： V 反总：反应总体积，1mL；V 样本：加入粗酶液体积，0.25mL；V 提取：加入提取液CB0068V-ES体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重(g)；d：光径，1cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10^-3mL/μmol/cm；T：反应时间，30min；500：细胞总数，500 万。

1. 如果 OD 值小于 0.01，适当加大提取用样本质量；OD 值大于 0.8，粗酶液可适当稀释，或者减少提取用样品质量。
2. 样品蛋白质含量需要另外测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。