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Diamine Oxidase Assay Kit (Microanalysis)

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货号 CB0068M

别名 二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒(微量法)

二胺氧化酶 (Diamine Oxidase, DAO; EC1.4.3.6) 广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、 植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

Diamine Oxidase Assay Kit (Microanalysis)

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货号 CB0068M 别名 二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒(微量法)

二胺氧化酶 (Diamine Oxidase, DAO; EC1.4.3.6) 广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、 植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

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产品介绍


生物活性
产品描述
二胺氧化酶 (Diamine Oxidase, DAO; EC1.4.3.6) 广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、 植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
别名二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒(微量法)

Handling Instruction | TargetMol 检测原理

DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺,在 500nm 处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算 DAO活性。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

100T/48S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0068M-ES 70mL×1 4℃保存。
CB0068M-A 0.25mL×1 4℃保存。
CB0068M-B 粉剂×1 4℃保存;临用前加入 4mL 蒸馏水溶解,4℃保存一个月。
CB0068M-C 1 mL×1 4℃保存。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、天平、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水。

二、粗酶液提取:

  1. 组织样品处理:
    按照组织质量(g):提取液CB0068M-ES体积 (mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL CB0068M-ES)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 20min,取上清,置冰上待测。
  2. 细胞样品处理:
    按照细胞数量(104 个):提取液 CB0068M-ES体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500万细胞加入 1mL CB0068M-ES),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然 后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
  3. 血清等液体样品:直接测定。

三、测定步骤:

  1. 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。
  2. 样本测定,在 EP管中按照下表操作:
试剂名称 对照管 (μL) 测定管 (μL)
粗酶液 50 50
CB0068M-ES 108 108
CB0068M-A 2 2
CB0068M-B 20 20
CB0068M-C 10
无水乙醇 10
混匀,37℃水浴 30min,蒸馏水调零,测定 500nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。

四、酶活性计算公式:

a. 使用孔板测定的计算公式如下
1.组织 DAO 活力的计算
(1)按蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO 活性 (U/mg prot) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(cpr×V 样本)÷T = 30×ΔA÷cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶 活力单位。
DAO 活性 (U/g鲜重) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(W÷V 提取×V 样本)÷T = 30×ΔA÷W
2.血清(浆)DAO 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO 活性 (U/mL) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷V 样本÷T = 30×ΔA
3.按细胞数量计算:
单位的定义:每 104 个细胞在反应体系中每分钟催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
DAO 活性 (U/104 cell) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(500×V 样÷V 提取)÷T = 0.06×ΔA
注: V 反总:反应总体积,0.2 mL;V 样本:加入粗酶液体积,0.05mL;V 提取,加入提取液体积,1mL;cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重(g);d:光径,0.6cm;ε:氧化型邻 联茴香胺消光系数,7.5×10-3mL/μmol/cm;T:反应时间,30min;500:细胞数量,500万。
b. 使用比色皿测定的计算公式如下

  1. 组织 DAO 活力的计算
    (1)按蛋白浓度计算
    单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
    DAO 活性 (U/mg prot) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(cpr×V 样本)÷T = 18×ΔA÷cpr
    (2)按样本鲜重计算
    单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
    DAO 活性 (U/g鲜重) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(W÷V 提取×V 样本)÷T = 18×ΔA÷W
  2. 血清(浆)DAO 活力的计算
    单位的定义:每 mL 血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
    DAO 活性 (U/mL) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷V 样本÷T = 18×ΔA
  3. 按细胞数量计算
    单位的定义:每 104个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
    DAO 活性 (U/104 cell) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(500×V 样÷V 提取)÷T = 0.036×ΔA
    注: V 反总:反应总体积,0.2 mL;V 样本:加入粗酶液体积,0.05mL;V 提取,加入提取液体积,1mL;cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;d:光径,1cm;ε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10-3mL/μmol/cm;T:反应时间,30min;500:细胞数量,500 万。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

1.如果 OD 值小于0.01,适当加大提取用样本质量;OD 值大于 0.8,粗酶液可适当稀释,或者减少提取用样品质量。
2.样品蛋白质含量需要另外测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

计算器

  • 摩尔浓度 计算器
  • 稀释 计算器
  • 配液 计算器
  • 分子量 计算器

体内实验配液计算器

请在以下方框中输入您的动物实验信息后点击计算,可以得到母液配置方法和体内配方的制备方法:
TargetMol | Animal experiments 比如您的给药剂量是10 mg/kg,每只动物体重20g,给药体积100 μLTargetMol | Animal experiments 一共给药动物10只,您使用的配方为5%TargetMol | reagent DMSO + 30%PEG300 + 5%Tween 80 + 60%Saline/PBS/ddH2O , 那么您的工作液浓度为2mg/mL
母液配置方法: 2 mg 药物溶于 50 μLDMSOTargetMol | reagent ( 母液浓度为 40 mg/mL ), 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度,请先与我们联系。
体内配方的制备方法:50μLDMSOTargetMol | reagent 母液,添加 300 μLPEG300TargetMol | reagent 混匀澄清,再加 50μLTween80, 混匀澄清,再加 600μLSaline/PBS/ddH2OTargetMol | reagent 混匀澄清

以上为“体内实验配液计算器”的使用方法举例,并不是具体某个化合物的推荐配制方式,请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。

方案所需的各类助溶剂如: DMSOPEG300 / PEG400Tween 80SBE-β-CD玉米油 等, 均可在TargetMol网站点击购买。
1 请输入动物实验的基本信息
mg/kg
g
μL
2 请输入动物体内配方组成,不同的产品配方组成不同,如有配方需求,可先联系我们提供正确的体内配方。
% DMSO
%
% Tween 80
% Saline/PBS/ddH2O

剂量转换

对于不同动物的给药剂量换算,您也可以参考 更多

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