Diamine Oxidase Assay Kit (Microanalysis)

DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺，在 500nm 处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算 DAO活性。

100T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、天平、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水。
二、粗酶液提取：

1. 组织样品处理：
   按照组织质量（g）：提取液CB0068M-ES体积 (mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，加入 1mL CB0068M-ES）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
2. 细胞样品处理：
   按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液 CB0068M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入 1mL CB0068M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然 后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体样品：直接测定。
   三、测定步骤：
4. 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。
5. 样本测定，在 EP管中按照下表操作：

四、酶活性计算公式：

a. 使用96孔板测定的计算公式如下

1. 组织 DAO 活力的计算
   （1）按蛋白浓度计算
   单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
   DAO 活性 (U/mg prot) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(cpr×V 样本)÷T = 30×ΔA÷cpr
   （2）按样本鲜重计算
   单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶 活力单位。
   DAO 活性 (U/g鲜重) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(W÷V 提取×V 样本)÷T = 30×ΔA÷W
2. 血清（浆）DAO 活力的计算
   单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
   DAO 活性 (U/mL) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷V 样本÷T = 30×ΔA
3. 按细胞数量计算：
   单位的定义：每 10⁴ 个细胞在反应体系中每分钟催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
   DAO 活性 (U/10⁴ cell) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(500×V 样÷V 提取)÷T = 0.06×ΔA
   注： V 反总：反应总体积，0.2 mL；V 样本：加入粗酶液体积，0.05mL；V 提取，加入提取液体积，1mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重(g)；d：光径，0.6cm；ε：氧化型邻 联茴香胺消光系数，7.5×10-³mL/μmol/cm；T：反应时间，30min；500：细胞数量，500万。
   b. 使用比色皿测定的计算公式如下
4. 组织 DAO 活力的计算
   （1）按蛋白浓度计算
   单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
   DAO 活性 (U/mg prot) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(cpr×V 样本)÷T = 18×ΔA÷cpr
   （2）按样本鲜重计算
   单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
   DAO 活性 (U/g鲜重) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(W÷V 提取×V 样本)÷T = 18×ΔA÷W
5. 血清（浆）DAO 活力的计算
   单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
   DAO 活性 (U/mL) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷V 样本÷T = 18×ΔA
6. 按细胞数量计算
   单位的定义：每 10⁴个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
   DAO 活性 (U/10⁴ cell) = ΔA÷d÷ε×V 反总÷(500×V 样÷V 提取)÷T = 0.036×ΔA
   注： V 反总：反应总体积，0.2 mL；V 样本：加入粗酶液体积，0.05mL；V 提取，加入提取液体积，1mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；d：光径，1cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10^-3mL/μmol/cm；T：反应时间，30min；500：细胞数量，500 万。

1. 如果 OD 值小于0.01，适当加大提取用样本质量；OD 值大于 0.8，粗酶液可适当稀释，或者减少提取用样品质量。
2. 样品蛋白质含量需要另外测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。