购物车
  • 全部删除
  • TargetMol
    您的购物车当前为空
Dehydroascorbate Reductase Activity Assay Kit (Microanalysis)

Dehydroascorbate Reductase Activity Assay Kit (Microanalysis)

一键复制产品信息
Rating icon 还可以
Dehydroascorbate Reductase Activity Assay Kit (Microanalysis)
产品编号 CB0065M
别名 脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性检测试剂盒(微量法)
规格价格库存数量
100 T
¥ 2,333
4-6日内发货
大包装 & 定制
加入购物车
TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
实验操作小课堂
常见问题解答
查看更多

Handling Instruction | TargetMol 检测原理

DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA,通过测定 DHA 减少速率,计算 DHAR 活性。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

100T/96S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0065M-A 100mL×1瓶 4℃保存。
CB0065M-B 15mL×1瓶 4℃保存。
CB0065M-C 粉剂×1瓶 -20℃避光保存,临用前加入 2.5mL 蒸馏水充分溶解。
CB0065M-D 粉剂×1瓶 4℃保存,临用前加入 2.5mL 蒸馏水充分溶解。

注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV板)、低温离心机、研钵、水浴锅、可调式移液枪、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取:

  1. 组织样本:

按照组织质量(g):CB0065M-A体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL CB0065M-A)进行冰浴匀浆;8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、细胞样本:

细菌、细胞:按照细胞数量(104 个):CB0065M-A体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入 1mL CB0065M-A),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);8000g 4℃离心 20min,取上清液置冰上混匀待测。
3. 液体样本:直接测定。

三、测定步骤:

  1. 紫外分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 265nm,蒸馏水调零。
  2. CB0065M-B在 25℃水浴锅中预热 30 min。
  3. 在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入:
试剂名称 测定管 (μL)
上清液 20
CB0065M-C 20
CB0065M-D 20
CB0065M-B 140
迅速混匀后于 265nm 比色,记录 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2,△A=A2-A1。

四、DHAR 活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

  1. 按样本蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR (U/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T = 92×△A ÷Cpr
2. 按样本鲜重计算

活性单位定义:25℃中每克样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR (U/g) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 92×△A ÷W
3. 按细菌或细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每 104 个细胞每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR (U/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 92×△A ÷细胞数量
4. 按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR (U/mL) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷V 样÷T = 92×△A
注:ε:AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol /cm;106:摩尔分子换算成微摩尔分子;d:比色杯光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4 L;V 样:反应体系中加入 上清液体积,20μL=0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL;W :样品质量;T:反应时间,2 min。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

  1. 按样本蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR (U/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T = 184×△A ÷Cpr
2. 按样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR (U/g) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 184×△A÷W
3. 按细菌或细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每 104 个细胞每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR (U/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 184×△A÷细胞数量
4. 按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。
DHAR (U/mL) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷V 样÷T = 184×△A
注: ε :AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol /cm;106:摩尔分子换算成微摩尔分子;d:96 孔板光径,0.5 cm;V 反总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4 L;V 样:反应体系中加入上清液体积,20μL = 0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL;W:样品质量;T:反应时间,2 min。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 临用前配制的试剂未使用完的 4℃保存,3 天内使用完。
  2. 蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。