DAPI Staining Solution

1. 灵敏度高，对双链DNA的染色灵敏度高于溴化乙锭多倍。
2. 细胞核标记特异性强，对DNA的亲和力显著高于RNA，RNA背景干扰小。
3. 荧光信号稳定，染色后荧光信号可维持数天。
4. 兼容性好，可与多重荧光探针共染。
5. 操作简便，检测快速。

细胞核形态观察、细胞周期分析、细胞计数与定位、染色体显带与核型分析、荧光原位杂交（FISH）实验。

用PBS将DAPI储备液稀释为0.5-10 μg/mL的DAPI染色工作液（避光操作）。具体浓度根据样本和实验需要进行调整。

1. 贴壁细胞染色
   （1）吸除旧培养基，用PBS洗涤细胞3次，每次3 min。
   （2）加入4%多聚甲醛，室温固定10 min。固定结束后，用PBS洗涤细胞3次，每次3 min。
   （3）加入0.1% Triton X-100（用PBS配制），破膜5-10 min。用PBS洗涤细胞3次，每次3 min。
   （4）若需要进行免疫荧光染色，则先进行封闭和抗体孵育，再进行DAPI染色。若不需其它染色，则直接进行DAPI染色。
   （5）加入DAPI染色工作液，室温下避光孵育5-15 min。PBS洗涤3次，每次3 min。
   （6）在载玻片上滴加适量抗荧光猝灭液，将有细胞的那面爬片贴合抗荧光猝灭液并放置其上，在爬片周围滴加封片液以封片。
   （7）在荧光显微镜下观察并拍照记录。Ex=340 nm，Em=488 nm左右。
2. 悬浮细胞染色
   （1）将细胞悬液以1000 rpm、4℃离心5 min，弃上清。加PBS重悬细胞，以1000 rpm、4℃离心5 min，弃上清。重复用PBS洗涤细胞1次。
   （2）加4%多聚甲醛，室温避光固定15-20 min。固定结束后，以1000 rpm、4℃离心5 min，弃上清。用PBS洗涤细胞2次。
   （3）加0.1% Triton X-100（用PBS配制），冰上避光破膜10-20 min。1000 rpm、4℃离心5 min，弃上清，用含0.1% Triton X-100 的PBS洗1次。
   （4）若需要进行免疫荧光染色，则先进行封闭和抗体孵育，再进行DAPI染色。若不需其它染色，则直接进行DAPI染色。
   （5）加入DAPI染色工作液，室温避光孵育10-15 min。1000 rpm、4℃离心5 min，弃上清，用PBS洗1次。
   （6）加入PBS重悬，用于流式细胞术检测或制成细胞涂片后在荧光显微镜下检测。Ex=340 nm，Em=488 nm左右。

-20℃避光保存，一年有效。

1. DAPI见光易分解，染色过程及染色后需全程避光。
2. 不同细胞类型、组织样本对DAPI的敏感性不同，建议通过预实验确定最佳染色浓度和时间，避免背景过高或染色过浅。
3. 荧光存在淬灭问题，建议封片后尽快拍照，若需保存，可4℃避光存放（但荧光仍会逐渐衰减）。
4. 建议设置未染色对照，排除非特异性荧光干扰。
5. DAPI具有一定毒性，操作时需戴手套，避免接触皮肤和黏膜，废弃液体按有毒废弃物处理。
6. 本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。