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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
---|---|---|---|
100 T | ¥ 1,296 | 4-6日内发货 |
采用3,5-二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。
100T/48S规格的产品组成如下:
组成 | 规格 | 储存条件 |
CB0061M-ES | 60mL×1瓶 | 4℃保存 |
CB0061M-A | 6mL×1瓶 | 4℃保存 |
CB0061M-B | 15mL×1瓶 | 4℃保存 |
CB0061M-Standard | 粉剂×1支 | 4℃保存 |
注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
一、自备用品:
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
二、样品测定的准备:
三、测定步骤:
试剂名称 | 测定管 (μL) | 对照管 (μL) | 标准管 (μL) | 空白管 (μL) | |||
样本 | 10 | 10 | |||||
CB0061M-A | 100 | ||||||
蒸馏水 | 100 | ||||||
混匀,37℃准确水浴2h。 | 混匀,37℃准确水浴2h。 | ||||||
CB0061M-B | 200 | 200 | 200 | ||||
标准品 | 10 | ||||||
蒸馏水 | 10 | ||||||
混匀,90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却后,测540nm下吸光值A,分别记为 A 测定、A 对照、A 标准、A 空白,计算 ΔA 测定=A 测定-A 对照,ΔA 标准=A 标准-A 空白。 |
注:每个测定管需设一个对照管,空白管和标准曲线只需做 1-2 次。
四、Cx活性计算:
绘制标准条件:
根据标准管浓度和吸光度(A 标准管-A 空白管)建立标准曲线,x 为标准品浓度(mg/mL),y为吸光度。根据标准曲线计算样本中还原糖的含量,即将ΔA(A 测定管-A 对照管)带入 x 计算出 y 值。
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/mL) = [1000×X×V 反总]÷V 样÷T = 91.67 X
2. 细胞、细菌和组织中Cx活力的计算:
(1)按照蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/mg prot) = [ [1000×X×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T = 91.67 X÷ Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/g鲜重) = [1000×X×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 91.67 X÷ W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/104 cell) = [1000×X×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 0.183 X
注:1000:1mg/mL=1000ug/mL;V 反总:反应体系总体积,0.11mL;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入CB0061M-ES体积,1 mL;T:反应时间,120 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
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