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Cx Assay Kit (Microanalysis)

Cx Assay Kit (Microanalysis)

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Cx Assay Kit (Microanalysis)
产品编号 CB0061M
别名 内切-β-1,4-葡聚糖酶活性检测试剂盒(微量法)
规格价格库存数量
100 T
¥ 1,296
4-6日内发货
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
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Handling Instruction | TargetMol 检测原理

采用3,5-二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

100T/48S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0061M-ES 60mL×1瓶 4℃保存
CB0061M-A 6mL×1瓶 4℃保存
CB0061M-B 15mL×1瓶 4℃保存
CB0061M-Standard 粉剂×1支 4℃保存

注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
二、样品测定的准备:

  1. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):CB0061M-ES体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL CB0061M-ES),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
  2. 组织:按照组织质量(g):CB0061M-ES体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL CB0061M-ES),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
  3. 血清(浆)样品:直接检测。

三、测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
  2. 标准品准备:临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解成10mg/ml的标准品原液备用(4℃可保存1周),再将标准品用蒸馏水稀释至 0.25、0.2、0.15、0.1、0.05mg/mL。
  3. 加样表(在EP管中依次加入下列试剂):
试剂名称 测定管 (μL) 对照管 (μL) 标准管 (μL) 空白管 (μL)
样本 10 10
CB0061M-A 100
蒸馏水 100
混匀,37℃准确水浴2h。 混匀,37℃准确水浴2h。
CB0061M-B 200 200 200
标准品 10
蒸馏水 10
混匀,90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却后,测540nm下吸光值A,分别记为 A 测定、A 对照、A 标准、A 空白,计算 ΔA 测定=A 测定-A 对照,ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注:每个测定管需设一个对照管,空白管和标准曲线只需做 1-2 次。
四、Cx活性计算:
绘制标准条件:
根据标准管浓度和吸光度(A 标准管-A 空白管)建立标准曲线,x 为标准品浓度(mg/mL),y为吸光度。根据标准曲线计算样本中还原糖的含量,即将ΔA(A 测定管-A 对照管)带入 x 计算出 y 值。

  1. 血清(浆)Cx活力的计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/mL) = [1000×X×V 反总]÷V 样÷T = 91.67 X
2. 细胞、细菌和组织中Cx活力的计算:

(1)按照蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/mg prot) = [ [1000×X×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T = 91.67 X÷ Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/g鲜重) = [1000×X×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 91.67 X÷ W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/104 cell) = [1000×X×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 0.183 X
注:1000:1mg/mL=1000ug/mL;V 反总:反应体系总体积,0.11mL;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入CB0061M-ES体积,1 mL;T:反应时间,120 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 每个测定管需设一个对照管。
  2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
  3. 蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
  4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。