Cx Assay Kit (Microanalysis)

采用3,5－二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。

100T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
二、样品测定的准备：

1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0061M-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0061M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：CB0061M-ES体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0061M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2. 标准品准备：临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解成10mg/ml的标准品原液备用（4℃可保存1周），再将标准品用蒸馏水稀释至 0.25、0.2、0.15、0.1、0.05mg/mL。
3. 加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：

注：每个测定管需设一个对照管，空白管和标准曲线只需做 1-2 次。
四、Cx活性计算：
绘制标准条件：
根据标准管浓度和吸光度（A 标准管-A 空白管）建立标准曲线，x 为标准品浓度（mg/mL）,y为吸光度。根据标准曲线计算样本中还原糖的含量，即将ΔA（A 测定管-A 对照管）带入 x 计算出 y 值。

1. 血清（浆）Cx活力的计算：

单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/mL) = [1000×X×V 反总]÷V 样÷T = 91.67 X
2. 细胞、细菌和组织中Cx活力的计算：

（1）按照蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/mg prot) = [ [1000×X×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T = 91.67 X÷ Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/g鲜重) = [1000×X×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 91.67 X÷ W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (U/10⁴ cell) = [1000×X×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 0.183 X
注：1000：1mg/mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.11mL；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入CB0061M-ES体积，1 mL；T：反应时间，120 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1. 每个测定管需设一个对照管。
2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
3. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。