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CSL Assay Kit (Microanalysis)

CSL Assay Kit (Microanalysis)

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CSL Assay Kit (Microanalysis)
产品编号 CB0059M
别名 半胱氨酰亚砜裂解酶活性检测试剂盒(微量法)
规格价格库存数量
100 T
¥ 1,512
10-12日内发货
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
实验操作小课堂
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Handling Instruction | TargetMol 检测原理

CSL催化S-甲基-L-半胱氨酸亚砜反应产生丙酮酸,与2,4-二硝基苯肼反应,在碱性条件下显棕红色,在510nm下有特征吸收峰。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

100T/48S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0059M-ES 100mL×1瓶 4℃保存。
CB0059M-A 粉剂×1瓶 4℃避光保存,临用前加入2mL水溶解,剩余试剂分装后-20℃保存。
CB0059M-B 粉剂×1瓶 -20℃避光保存,临用前加入10mL水溶解,剩余试剂分装后-20℃保存。
CB0059M-C 15mL×1瓶 4℃保存。
CB0059M-D 6mL×1瓶 4℃避光保存。
CB0059M-E 30mL×1瓶 4℃保存。
CB0059M-Standard 粉剂×1支 临用前加入 1.4mL 蒸馏水,即 2µmol/mL,-20℃保存。

注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
酶标仪、96孔板/微量玻璃比色皿、天平、研钵、离心机、恒温水浴锅、蒸馏水。
二、样本处理:

  1. 按照组织质量(g):提取液CB0059M-ES体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL CB0059M-ES),进行冰浴匀浆,4℃浸提40min。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
  2. 血清(浆)样品:直接检测。

三、测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至660nm。
  2. 标准液的稀释:将2µmol/mL的标准溶液用蒸馏水等比稀释至2、1.75、1.5、1.25、1、0.75、0.5nmol/mL标准溶液待测。
  3. 酶促反应(在EP管中加入下列试剂):
试剂名称 对照管 (μL) 测定管 (μL) 标准管 (μL) 空白管 (μL)
样品 50 50
标准溶液 50
CB0059M-A 25 25 25
蒸馏水 25 25
CB0059M-B 25 25 25 25
充分混匀,37℃反应20min。
CB0059M-C 100 100 100 100
CB0059M-D 50 50 50 50
充分混匀,室温反应5min。
CB0059M-E 250 250 250 250
充分混匀,静置5min,于1mL玻璃比色皿测定510nm处吸光值,分别记为A 对照管、A 测定管、A 标准管和A 空白管,△A 测定=A 测定-A 对照,ΔA 标准=A 标准管-空白管。每个测定管设一个对照管。

四、CSL酶活性计算:
标准曲线的绘制:
以标准溶液浓度为 x 轴(x,nmol/mL),标准溶液对应的 ΔA 标准为 y 轴(y,ΔA 标准),建立标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将 ΔA 测定带入方程得到 x(nmol/mL)。

  1. 酶活计算:
    (1)按蛋白含量计算:

C-S lyase活性 (nmol/min/mg prot) =x×V 样÷(V 样×Cpr)÷T = x÷ Cpr×0.05
(2)按照样本质量计算:

C-S lyase活性 (nmol/min/g 鲜重) = x×V 样÷(V 样÷V 样总×W )÷T = x÷ W×0.05
注:V 样,加入样本上清体积,0.05mL;V 样总:加入提取液CB0059M-ES体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T,反应时间,20min。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
  2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。