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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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100 T | ¥ 2,970 | 10-12日内发货 |
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加,以此来表示CK酶活。
100T/96S规格的产品组成如下:
组成 | 规格 | 储存条件 |
CB0056M-ES | 110mL×1瓶 | 4℃保存。 |
CB0056M-A | 粉剂×1瓶 | -20℃保存;临用前加 5mL 蒸馏水溶解;用不完的分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 |
CB0056M-B | 粉剂×1瓶 | -20℃保存;临用前加入 0.5mL 蒸馏水溶解;用不完的分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 |
CB0056M-C | 粉剂×1瓶 | -20℃保存;临用前加入 0.5mL 蒸馏水溶解;用不完的分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 |
CB0056M-D | 粉剂×1瓶 | -20℃保存;临用前加入 0.65mL 蒸馏水溶解;用不完的分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 |
CB0056M-E | 5mL×1瓶 | 4℃保存。 |
工作液:临用前根据用量将试剂A、试剂B、试剂C、试剂D、试剂E以 70:4:7:10:90 的比例混合(体积比)。现用现配。使用前室温孵育 20min。 |
注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
一、自备用品:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、恒温水浴锅、研钵/ 匀浆器、蒸馏水。
二、粗酶液提取:
三、测定步骤:
试剂名称 | 空白管 (μL) | 测定管 (μL) |
粗酶液 | 40 | |
工作液 | 90 | 90 |
H2O | 110 | 70 |
在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入上述试剂,充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1, 迅速置于37℃水浴或者培养箱3min,拿出迅速擦干测定190s 时的吸光值A2,计算ΔA 测定管= A2测定-A1测定,ΔA 空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管。(空白管只需做1-2次) |
活性单位定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×Cpr) ÷T=268×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算:
活性单位定义:37℃,pH7.0时,每克样本每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=268×ΔA÷W
3. 按血清体积计算:
活性单位定义:37℃,pH7.0时,每mL血清每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷V 样÷T=268×ΔA
4. 按细胞数量计算:
活性单位定义:37℃,pH7.0时,每1万个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(U/104 cell)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T=268×ΔA÷细胞数量
注: ε:NADPH的摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,2×10-4L;V 样:反应体系中样本体积,0.04mL;V 样总:CB0056M-ES体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 细胞数量:以104为单位计算,万个;T:反应时间,3min;109:单位换算系数,1mol=109nmol。
b. 按96孔UV板计算:
将上述公式中的d=1cm改为0.6cm(96孔板光径)进行计算即可。
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