Creatine Kinase(CK) Activity Assay Kit (Microanalysis)

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加，以此来表示CK酶活。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、恒温水浴锅、研钵/ 匀浆器、蒸馏水。
二、粗酶液提取：

1. 组织样本：按照组织质量（g）：CB0056M-ES体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mLCB0056M-ES） 进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2. 血清样本：直接测定。
3. 细胞样本：按照细胞数量（10⁴个）：CB0056M-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0056M-ES）加入CB0056M-ES，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g 离心10min，取上清待测。

三、测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 操作表：在微量石英比色皿/96孔板中加入下列试剂：

活性单位定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹÷(V 样×Cpr) ÷T=268×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算：

活性单位定义：37℃，pH7.0时，每克样本每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=268×ΔA÷W
3. 按血清体积计算：

活性单位定义：37℃，pH7.0时，每mL血清每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹÷V 样÷T=268×ΔA
4. 按细胞数量计算：

活性单位定义：37℃，pH7.0时，每1万个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×10⁹÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T=268×ΔA÷细胞数量
注： ε：NADPH的摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积，2×10^-4L；V 样：反应体系中样本体积，0.04mL；V 样总：CB0056M-ES体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g； 细胞数量：以10⁴为单位计算，万个；T：反应时间，3min；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。
b. 按96孔UV板计算：

将上述公式中的d=1cm改为0.6cm（96孔板光径）进行计算即可。

1. 血清的CK不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定24h。
2. 样本蛋白质含量需要另外测定。
3. OD 值大于 0.6 可用CB0056M-ES适当稀释样本，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。
4. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。