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Creatine Kinase(CK) Activity Assay Kit (Microanalysis)

Creatine Kinase(CK) Activity Assay Kit (Microanalysis)

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Creatine Kinase(CK) Activity Assay Kit (Microanalysis)
产品编号 CB0056M
别名 肌酸激酶活性检测试剂盒(微量法)
规格价格库存数量
100 T
¥ 2,970
10-12日内发货
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
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Handling Instruction | TargetMol 检测原理

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加,以此来表示CK酶活。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

100T/96S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0056M-ES 110mL×1瓶 4℃保存。
CB0056M-A 粉剂×1瓶 -20℃保存;临用前加 5mL 蒸馏水溶解;用不完的分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
CB0056M-B 粉剂×1瓶 -20℃保存;临用前加入 0.5mL 蒸馏水溶解;用不完的分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
CB0056M-C 粉剂×1瓶 -20℃保存;临用前加入 0.5mL 蒸馏水溶解;用不完的分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
CB0056M-D 粉剂×1瓶 -20℃保存;临用前加入 0.65mL 蒸馏水溶解;用不完的分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
CB0056M-E 5mL×1瓶 4℃保存。
工作液:临用前根据用量将试剂A、试剂B、试剂C、试剂D、试剂E以 70:4:7:10:90 的比例混合(体积比)。现用现配。使用前室温孵育 20min。

注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、恒温水浴锅、研钵/ 匀浆器、蒸馏水。
二、粗酶液提取:

  1. 组织样本:按照组织质量(g):CB0056M-ES体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mLCB0056M-ES) 进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。
  2. 血清样本:直接测定。
  3. 细胞样本:按照细胞数量(104个):CB0056M-ES体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL CB0056M-ES)加入CB0056M-ES,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g 离心10min,取上清待测。

三、测定步骤:

  1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
  2. 操作表:在微量石英比色皿/96孔板中加入下列试剂:
试剂名称 空白管 (μL) 测定管 (μL)
粗酶液 40
工作液 90 90
H2O 110 70
在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入上述试剂,充分混匀后于340nm处测定10s时的吸光值A1, 迅速置于37℃水浴或者培养箱3min,拿出迅速擦干测定190s 时的吸光值A2,计算ΔA 测定管= A2测定-A1测定,ΔA 空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管。(空白管只需做1-2次)
四、CK活性计算公式: a. 按微量石英比色皿计算 1. 按蛋白浓度计算:

活性单位定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×Cpr) ÷T=268×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算:

活性单位定义:37℃,pH7.0时,每克样本每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=268×ΔA÷W
3. 按血清体积计算:

活性单位定义:37℃,pH7.0时,每mL血清每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷V 样÷T=268×ΔA
4. 按细胞数量计算:

活性单位定义:37℃,pH7.0时,每1万个细胞每分钟催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(U/104 cell)=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T=268×ΔA÷细胞数量
注: ε:NADPH的摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,2×10-4L;V 样:反应体系中样本体积,0.04mL;V 样总:CB0056M-ES体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 细胞数量:以104为单位计算,万个;T:反应时间,3min;109:单位换算系数,1mol=109nmol。
b. 按96孔UV板计算

将上述公式中的d=1cm改为0.6cm(96孔板光径)进行计算即可。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 血清的CK不稳定,采集样本后尽快测定,4℃避光保存可稳定24h。
  2. 样本蛋白质含量需要另外测定。
  3. OD 值大于 0.6 可用CB0056M-ES适当稀释样本,并在计算公式中相应的改变稀释倍数。
  4. 蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
  5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。