Citric Acid Assay Kit (Microanalysis)

酸性条件下，柠檬酸还原 Cr6+生成 Cr3+，在 545nm 处有特征吸收峰；通过测定 545nm 吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
二、样本的前处理：

1. 液体样品：取 0.1mL 液体加CB0054M-A 0.9mL，充分混匀，11000g，4℃离心 10min，取上清液，待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：CB0054M-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0054M-A）进行冰浴匀浆。11000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
3. 线粒体：按照组织质量（g）：CB0054M-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0054M-A）进行冰浴匀浆，600g/min，4℃离心 5min；取上清至另一 EP 管中，11000g，4℃离心 10min，弃上清（此上清液可用于细胞质 CA 含量测定）；向沉淀中加CB0054M-B 200μl，以及CB0054M-C 2μl，充分悬浮溶解，11000g，4℃离心 10min，取上清液，待测。
4. 细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：CB0054M-A体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0054M-A），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；11000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

三、测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 545 nm，蒸馏水调零。
2. 将CB0054M-A置于 30℃水浴中预热 30min。
3. 在EP管或96 孔板中加入下列试剂：

注：空白管和标准管各需测定1-2次。
四、柠檬酸(CA)计算公式：
按液体样品的体积计算：

柠檬酸含量 (mmol/L) = [C标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×样品稀释倍数
= 2.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
注：C标准液：250 μmol/L = 0.25 mmol/L；样品稀释倍数：(0.1 mL 样品+0.9mL CB0054M-A)÷0.1 mL样品=10。
按组织质量计算：

柠檬酸含量 (μmol/g) = [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W
= 0.25×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
注： C标准液：250 μmol/L；V总：上清液总体积，1.0 mL=0.001 L；W：样品质量，g。
按蛋白含量计算：

柠檬酸含量 (μmol/mg prot) = [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]÷Cpr
= 0.25×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
注： C标准液：250 μmol/L=0.25 μmol/mL；Cpr：上清液蛋白质含量，mg/mL。
按细胞数量计算：

柠檬酸含量 (μmol/10⁴ cell) = [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V总÷细胞数量= 0.25×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷细胞数量
注： C标准液：250 μmol/L；V总：上清液总体积，1.0 mL=0.001 L。

1. 样品处理等过程均需要在冰上进行。
2. CB0054M-D需现配现用，配置好的一周内使用完。
3. CB0054M-E为易致癌物质，实验过程中，需佩戴手套，避免溅到皮肤上。
4. 柠檬酸提取液不能用于蛋白含量测定，如需测定蛋白含量，需另取组织。
5. 若反应 30min 后有明显的黑色小颗粒，属于正常现象，需将样本稀释后再测。
6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。