ChlorophyllAssay Kit (Spectrophotometry)

叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b以及总叶绿素含量。

50T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、天平、研钵/匀浆器、10mL玻璃试管、锡箔纸、丙酮。
二、测定步骤：

1. 称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉，称取约0.1g，剪碎，用蒸馏水洗干净。
2. 提取液的准备：取120mL蒸馏水和480mL丙酮，充分混匀待用。
3. 加入1mL蒸馏水，少量CB0050S-A（约50mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL玻璃试管。
4. 用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入玻璃试管，用提取液补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。
5. 取浸提液1mL于1mL玻璃比色皿，提取液调零，测定663nm和645nm处吸光值，分别记为A663和A645。

三、计算公式：

1. 叶绿素a含量 (mg/g 鲜重)

= (12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅)×V 提×F÷W÷1000
= 0.01×(12.7× A₆₆₃ – 2.69 × A₆₄₅)×F÷W
2. 叶绿素b含量 (mg/g 鲜重)

= (22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃)×V 提×F÷W÷1000
= 0.01×(22.9× A₆₄₅ – 4.68 × A₆₆₃)×F÷W
3. 叶绿素总含量 (mg/g 鲜重)

= (20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃)×V 提×F÷W÷1000
= 0.01×(20.21× A₆₄₅ +8.02 × A₆₆₃)×F÷W
注：V 提：提取液体积，10mL；F：稀释倍数；W：样本质量，g。

1. 叶绿素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。
2. 一定要浸提至组织残渣完全变白，否则提取不充分。
3. 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至EP管。
4. 测定时吸光值超过1，可进行适当稀释；当吸光值小于0.05时，可以适当减少V提取的用量，注意计算公式中改变V提取数值。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。