CHI Assay Kit (Microanalysis)

查尔酮异构酶（CHI）催化查尔酮环化形成 4,5,7-三羟基黄烷酮，通过测定381nm下的吸光度变化表示CHI的活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
二、酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：CB0048M-ES体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0048M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至381nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定表：

在微量石英比色皿或96孔板中加入10µL上清液和190µL CB0048M-B，立即混匀并记录381nm下初始吸光值A1和37℃保温30min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
四、CHI活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时A381变化0.1为一个酶活力单位。
CHI (U/mg prot)_= ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.1÷T = 400×ΔA÷Cpr

2. 按样本鲜重计算

单位定义：每g组织在每mL反应体系中每小时A381变化0.1为一个酶活力单位。
CHI (U/g 鲜重) = ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.1÷T = 400×ΔA÷W
注：V 反总：反应体系总体积，0.2mL；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液（CB0048M-ES）体积，1 mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
b. 用96孔板测定的计算公式如下

1. 按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时A381变化0.05为一个酶活力单位。
CHI (U/mg prot) = ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.05÷T = 800×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算

单位定义：每g组织在每mL反应体系中每小时A381变化0.05为一个酶活力单位。
CHI (U/g 鲜重) = ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.05÷T = 800×ΔA÷W
注：V 反总：反应体系总体积，0.2mL； V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液（CB0048M-ES）体积，1 mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。