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CAD Assay Kit (Microanalysis)

CAD Assay Kit (Microanalysis)

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CAD Assay Kit (Microanalysis)
产品编号 CB0041M
别名 肉桂醇脱氢酶活性检测试剂盒(微量法)
规格价格库存数量
100 T
¥ 1,728
10-12日内发货
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
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Handling Instruction | TargetMol 检测原理

CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下测定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

100T/96S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0041M-ES 100mL×1瓶 4℃保存
CB0041M-A 25mL×1瓶 4℃保存
CB0041M-B 粉剂×2瓶 -20℃保存

注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
二、样品处理:

  1. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):CB0041M-ES体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL CB0041M-ES),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
  2. 组织:按照组织质量(g):CB0041M-ES体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL CB0041M-ES),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

三、测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
  2. 样本测定

(1)在CB0041M-B中加入10mL CB0041M-A充分溶解混匀,室温使用涡旋振荡仪振荡溶解15min,如未溶解可适当延长振荡时间;置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用(配好后24h内用完)。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂:

试剂名称 测定管 (μL)
样本 10
CB0041M-B 190
混匀,立即记录340nm处初始吸光值A1和 5min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。

四、CAD酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

  1. 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 643×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T = 643×ΔA÷W
3. 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/104 cell) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 1.286×ΔA
注:V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
b. 用96孔板测定的计算公式如下

  1. 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 1286×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 1286×ΔA÷W
3. 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/104 cell) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 2.572×ΔA
注:V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
  2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。