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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
---|---|---|---|
100 T | ¥ 1,728 | 10-12日内发货 |
CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下测定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。
100T/96S规格的产品组成如下:
组成 | 规格 | 储存条件 |
CB0041M-ES | 100mL×1瓶 | 4℃保存 |
CB0041M-A | 25mL×1瓶 | 4℃保存 |
CB0041M-B | 粉剂×2瓶 | -20℃保存 |
注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
一、自备用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
二、样品处理:
三、测定步骤:
(1)在CB0041M-B中加入10mL CB0041M-A充分溶解混匀,室温使用涡旋振荡仪振荡溶解15min,如未溶解可适当延长振荡时间;置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min;现配现用(配好后24h内用完)。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂:
试剂名称 | 测定管 (μL) |
样本 | 10 |
CB0041M-B | 190 |
混匀,立即记录340nm处初始吸光值A1和 5min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。 |
四、CAD酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 643×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T = 643×ΔA÷W
3. 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/104 cell) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 1.286×ΔA
注:V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 1286×ΔA÷Cpr
2. 按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 1286×ΔA÷W
3. 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
CAD (nmol/min/104 cell) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 2.572×ΔA
注:V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
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