Ca++Mg++-ATPase Assay Kit (Microanalysis)

Name: Ca++Mg++-ATPase Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0040M
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0040M

别名 Ca++Mg++-ATP酶活性检测试剂盒（微量法）

Ca++Mg++-ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 616	4-6日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

根据 Ca++Mg++-ATP 酶分解 ATP 生成 ADP 及无机磷，通过测定无机磷的量来确定 ATP 酶活性高低。

产品组成

100T/48S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0040M-ES	60mL ×1瓶	4℃保存。
CB0040M-A	10mL×1 瓶	4℃保存。
CB0040M-B	粉剂×1 瓶	-20℃保存；临用前加入 6mL 蒸馏水充分混匀待用；用不完的试剂 4℃ 保存一周。
CB0040M-C	2mL×1 瓶	4℃保存。
CB0040M-D	粉剂×1 瓶	4℃保存；用时加入 3mL 蒸馏水，4℃保存。
CB0040M-E	粉剂×1 瓶	4℃保存；用时加入 5mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
CB0040M-F	粉剂×1 瓶	4℃保存；用时加入 5mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。
CB0040M-G	5mL×1 瓶	室温保存。
CB0040M-标储	1mL×1 瓶	10mmol/L标准磷储备液，4℃保存。
标准磷应用液(0.5μmol/mL)	CB0040M-标储20 倍稀释，即取 0.1mL CB0040M-标储加 1.9mL 蒸馏水，充分混匀即可。
定磷剂的配制	按 H2O：CB0040M-E：CB0040M-F：CB0040M-G= 2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

二、样品酶液的制备：
1.细菌、细胞样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0040M-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0040M-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：按照组织质量（g）：CB0040M-ES体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0040M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 660nm，蒸馏水调零。
2.酶促反应（在 EP 管中加入下列试剂）：

试剂名称	对照管 (μL)	测定管 (μL)
CB0040M-A	65	45
CB0040M-B	60	60
CB0040M-C		20
样本		100
混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确水浴 10min。
CB0040M-D	25	25
样本	100
混匀，8000g，25℃离心 10min，取上清液。

3.定磷（在EP管或96 孔板中加入下列试剂）：

试剂名称	空白管 (μL)	标准管 (μL)	对照管 (μL)	测定管 (μL)
标准磷应用液0.5μmol/mL		20
上清液			20	20
蒸馏水	20
定磷试剂	200	200	200	200
混匀，室温放置 30min，在 660nm 处比色，记录各管吸光值。

注：空白管和标准管只需要测定1-2次。

四、Ca++Mg++-ATP 酶活性计算公式：
1.血清（浆）Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶活力的计算

定义：每小时每毫升血清（浆）中 Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶活力(U/ mL) = [ C 标准管×V 总]×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷V 样÷T=7.5×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
2.组织、细菌或细胞中 Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶活力的计算：

（1）按蛋白浓度计算：
定义：每小时每毫克组织蛋白中 Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP 酶活力 (U/mg prot) = [C 标准管×V 总]×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(V 样×Cpr)÷T = 7.5×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
定义：每小时每克组织中Ca++ Mg++-ATP 酶分解ATP产生1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP 酶活力 (U/g 鲜重) =[C 标准管×V 总]×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 7.5×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
定义：规定每小时每 1 万个细菌或细胞中 Ca++ Mg++-ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++ Mg++-ATP 酶活力(U/10⁴ cell) = [C 标准管×V 总]×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 0.015×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
注： C 标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V 总：酶促反应总体积，0.25mL；V 样：加入样本体积，0.1mL ；V 样总：加入CB0040M-ES体积，1mL；T：反应时间，1/6 小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

注意事项

1.配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
2.由于每一个样都必须做对照，本试剂盒 100 管只能测 48 份 Ca++Mg++-ATP 酶。
3.本测定方法具有微量、灵敏、快速的特点，所以对测定所用试管要求严格无磷，避免磷污染是检测成败的关键。
4.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。