C1 Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

采用3,5－二硝基水杨酸法测定C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。

50T/24S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
二、样品测定的准备：

1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0038V-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0038V-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：CB0038V-ES体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0038V-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2. 将 100 mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 5、4、3、2、1.5、1mg/mL 的标准溶液备用。
3. 加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：

四、C1活性计算：
标准曲线的绘制

1. 根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA 标准（y，ΔA 标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测 定（y，ΔA 测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。
2. Cx活性的计算
   （1）血清（浆）Cx活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (μg /min/mL) = x×V 反总÷V 样÷T = 0.0917x
（2）按照蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (μg /min/mg prot) = x×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T = 0.0917x÷Cpr
（3）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (μg /min /g鲜重) = x×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T = 0.0917x÷W
（4）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
Cx活力 (μg /min /10⁴ cell) = x×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 0.000183x
注：1000：1mg/mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.55mL；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。