ATP Assay Kit (Microanalysis)

自备用品

分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

ATP 提取

1. 血清（浆）中 ATP 的提取

按照血清（浆）体积（mL）：CB0032M-ES-Acidic提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1mL 血清（浆）， 加入 1mL CB0032M-ES-Acidic提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入等体积 的 CB0032M-ES-Basic提取液使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

2. 组织样本中 ATP 的提取

按照组织质量（g）：ES415-酸性提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL ES415- 酸性提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清至另一 EP 管中，加入等体积的 ES415-碱性提取液 使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

3. 细胞中 ATP 的提取

先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：ES415-酸性提取液体积（mL）为 500~1000： 1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL ES415-酸性提取液），超声波破碎 1min（冰浴，强度 20％或 200W， 超声 2s，停 1s），8000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入等体积的 ES415-碱性提取液使之中 和，混匀，8000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

测定步骤

1. 仪器准备

分光光度计或酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 700 nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）

注意：空白管和标准管通常只需要各做 1–2 个，每个测定管设一个对照管。

ATP 含量计算公式

1. 血清（浆）中 ATP 含量计算

ATP 含量 (μmol/mL) = [C 标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2) = 40×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

2. 组织、细胞中 ATP 含量

（1）按蛋白浓度计算 ATP 含量 (μmol/mg prot) = [C 标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V1]÷(V1÷Cpr) = 2×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算
ATP 含量 (μmol/g 鲜重) = [C 标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V1]÷(W×V1÷V2)
= 4×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

（3）按细菌或细胞密度计算
ATP 含量 (μmol/104 cell) = [C 标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)
= 0.008×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

注：C 标准管：标准液浓度，2μmol/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，2mL；
V3：加入血清（浆）体积：0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，
500 万。