ATP Assay Kit (Microanalysis)

肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量，以此反应ATP含量。

100T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。

二、ATP提取：
1.血清（浆）中ATP的提取：

按照血清（浆）体积（mL）：CB0032M-ES-酸性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL CB0032M-ES-酸性提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一EP管中，加入等体积的CB0032M-ES-碱性提取液使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

2.组织中ATP的提取：

按照组织质量（g）：CB0032M-ES-酸性提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0032M-ES-酸性提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清至另一EP管中，加入等体积的CB0032M-ES-碱性提取液使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

3.细胞或细菌中ATP的提取：

先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：CB0032M-ES-酸性提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL CB0032M-ES-酸性提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，超声2s，停1s），8000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一EP管中，加入等体积的CB0032M-ES-碱性提取液使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30 min以上，调节波长到700nm，蒸馏水调零。
2.显色剂的配制：临用前请根据拟用显色剂体积（样本数×0.87mL），按CB0032M-D (mL)：CB0032M-E（mL）=1：5的比例配制。用多少配多少。
3.样本测定（在EP管中加入下列试剂）：

四、ATP含量计算公式：
1.血清（浆）中ATP含量计算

ATP含量 (μmol/mL) = [C标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)
= 40×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
2.组织、细菌或细胞中ATP含量计算

（1）按蛋白浓度计算
ATP含量 (μmol/mg prot) = [C标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V1]÷(V1÷Cpr)
= 2×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
ATP含量 (μmol/g鲜重) = [C标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V1]÷(W×V1÷V2)
= 4×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
ATP含量 (μmol/10⁴ cell) = [C标准管×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)
= 0.008×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
注：C标准管：标准液浓度，2μmol/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，2mL；V3：加入血清（浆）体积：0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。

1.最低检测限为10nmol/mL或10nmol/g鲜重或0.1nmol/mg prot。
2.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0032M-ATP含量检测试剂盒（微量法）-中文(232 KB)