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ATP Assay Kit

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货号 C0212

别名 ATP 含量检测试剂盒

TargetMol 的 ATP 含量检测试剂盒是一种用于定量检测细胞或组织样品中三磷酸腺苷(ATP)含量的高灵敏度化学发光检测试剂。ATP 是细胞内最重要的能量供体,广泛参与细胞代谢、信号转导及生理功能调控,其含量水平可直接反映细胞活力、代谢状态及损伤程度,因此常被用作评价细胞生存状态和能量代谢的重要指标。
本试剂盒基于荧光素-荧光素酶(Luciferin-Firefly Luciferase)发光反应原理:在荧光素酶的催化作用下,ATP 驱动荧光素氧化生成激发态产物并释放可检测的化学发光信号,发光强度与样品中 ATP 含量呈良好的线性关系。该方法灵敏度高、背景低、响应快速,可实现对 ATP 的准确定量分析。

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货号 C0212 别名 ATP 含量检测试剂盒

TargetMol 的 ATP 含量检测试剂盒是一种用于定量检测细胞或组织样品中三磷酸腺苷(ATP)含量的高灵敏度化学发光检测试剂。ATP 是细胞内最重要的能量供体,广泛参与细胞代谢、信号转导及生理功能调控,其含量水平可直接反映细胞活力、代谢状态及损伤程度,因此常被用作评价细胞生存状态和能量代谢的重要指标。
本试剂盒基于荧光素-荧光素酶(Luciferin-Firefly Luciferase)发光反应原理:在荧光素酶的催化作用下,ATP 驱动荧光素氧化生成激发态产物并释放可检测的化学发光信号,发光强度与样品中 ATP 含量呈良好的线性关系。该方法灵敏度高、背景低、响应快速,可实现对 ATP 的准确定量分析。

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100 T
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Handling Instruction | TargetMol 产品信息

100 T规格的产品组成如下:

产品编号 产品名称 产品包装
C0212-1 ATP检测试剂 (10×) (ATP Detection Reagent) 250 μL*2
C0212-2 ATP检测试剂稀释液 (ATP Detection Reagent Diluent) 5 mL
C0212-3 ATP标准溶液 (0.5 mM) (ATP Standard Solution) 500 μL
C0212-4 ATP检测裂解液 (ATP Detection Lysis Buffer) 10 mL

Handling Instruction | TargetMol 产品特点

  • 样品制备简便:配套专用裂解液,可直接裂解细胞或组织样品,无需复杂的ATP抽提或煮沸处理。
  • 高灵敏度检测:线性范围宽,在0.1 nM-10 μM范围内有良好检测效果,满足常规细胞与组织样品检测需求。
  • 发光信号稳定:化学发光信号衰减小,读数稳定,结果可靠。ATP标准曲线的检测结果显示,孵育10 min后检测,在30 min内化学发光无明显下降。
  • 样品兼容性好:裂解后的样品可同时用于ATP检测及后续蛋白相关实验。
  • 操作高效省时:检测流程快速,30–60 min内即可完成多样品测定。

Handling Instruction | TargetMol 产品应用

用于定量检测细胞或组织样品中的ATP含量,广泛应用于细胞活力评估、药物毒性与药效筛选、能量代谢研究以及细胞损伤与凋亡相关研究。

Handling Instruction | TargetMol 使用说明

1. 样品准备(建议在4℃或冰上进行)
1)贴壁细胞
吸尽培养基后,按培养板规格加入相应体积的裂解液(6孔板每孔约200 μL,96孔板每孔约50 μL,384孔板每孔约25 μL)。轻轻晃动培养板或用移液器反复吹打,使裂解液充分覆盖并裂解细胞。细胞通常在接触裂解液后迅速裂解。裂解完成后,于4℃,12,000 g离心5 min,取上清用于后续ATP含量检测。
2)悬浮细胞
将细胞悬液离心收集细胞沉淀,弃去上清后轻轻重悬细胞。按与贴壁细胞相同的细胞量比例加入裂解液(6孔板每孔约200 μL,96孔板每孔约50 μL,384孔板每孔约25 μL),轻轻吹打、弹击管底或短暂振荡以促进充分裂解。裂解后于4℃,12,000 g离心5 min,取上清用于检测。
3)组织样品
按每20 mg组织加入约100–200 μL裂解液的比例加入裂解液,使用玻璃匀浆器或其他合适的匀浆设备充分匀浆,以确保组织完全裂解。裂解完成后,于4℃,12,000 g离心5 min,取上清用于检测。
2. 标准溶液准备(选做)
1)将ATP标准溶液及相关试剂置于冰上缓慢融化。使用ATP检测裂解液对ATP标准溶液进行梯度稀释,配制一系列不同浓度的ATP标准品。标准品浓度范围应根据待测样品中ATP含量进行合理设定。一般建议以10 μM为起始浓度,按3倍递减方式连续稀释,制备8个浓度梯度用于绘制标准曲线。
2)后续实验中,可根据实际样品中ATP含量水平,对标准品的起始浓度及梯度范围进行适当调整,以获得最佳线性关系。
:在进行6孔板样品检测时建议同时绘制ATP标准曲线以实现绝对定量;对于96孔板或384孔板样品,如仅用于比较相对ATP含量,可根据实验需求选择是否制作标准曲线。
3. ATP检测工作液配制
1)根据实验设计计算所需ATP检测工作液的总体积,每个样品或标准品建议使用约50 μL ATP检测工作液。
2)将ATP检测试剂及相关试剂置于冰上缓慢融化。取适量ATP检测试剂,按1:9(v/v)的比例加入ATP检测试剂稀释液进行稀释,充分混匀后即为ATP检测工作液。
:配制完成的ATP检测工作液建议 现配现用,如需短时间保存,可置于冰浴条件下暂存。
4. ATP含量检测
1)对于6孔板样品
a.在白色不透光96孔板的检测孔或专用检测管中,预先加入50 μL ATP检测工作液,于室温静置5 min,以消耗体系中的背景ATP、降低本底信号。为提高效率,可一次性为10–20个检测孔或检测管同时加入检测工作液。
b.向上述孔或检测管中加入50 μL样品上清或ATP标准品,轻轻震荡混匀5 min,随后在室温避光条件下孵育10 min。孵育完成后,使用化学发光仪(Luminometer)或液闪仪进行检测,记录RLU值或CPM值,推荐检测时间为每孔1 s。
2)对于96孔板或384孔板样品(适用于细胞直接培养于白色不透光孔板中的情况)
a.将待测培养板从培养环境中取出,放置至室温平衡。随后向每孔加入ATP裂解液:96孔板每孔50 μL;384孔板每孔25 μL。轻轻震荡5 min,以充分裂解细胞并释放ATP。
b.向各孔中加入相应体积的ATP检测工作液(96孔板每孔50 μL,384孔板每孔25 μL),震荡混匀5 min,并在室温避光条件下孵育10 min。随后使用化学发光仪或液闪仪进行检测,推荐检测时间为每孔1 s。
注:
96孔板中每孔总体积为:培养基100 μL + ATP裂解液50 μL + ATP检测工作液50 μL
384孔板中每孔总体积为:培养基50 μL + ATP裂解液25 μL + ATP检测工作液25 μL
3)数据计算与归一化
c.根据ATP标准曲线,计算各样品中ATP的浓度。
d.为减少样品间因细胞数量或蛋白含量差异带来的影响,建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(C0050)测定样品蛋白含量,并将ATP含量结果换算为nmol /mg蛋白的形式进行分析。

Handling Instruction | TargetMol 储存条件

-20℃保存,半年有效;-80℃保存,一年有效。
C0212-1需避光保存。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. ATP检测试剂含有荧光素酶,反复冻融可能导致酶活下降,建议分装保存,稀释后的工作液建议现配现用,不宜冻存。
  2. ATP在裂解后不稳定,样品制备及检测过程建议在4℃或冰上进行,ATP在冰上可稳定约6 h。
  3. 本试剂盒需配合化学发光仪使用,如无该设备亦可使用液闪仪,但检测灵敏度取决于仪器性能。
  4. 使用可检测化学发光的多功能酶标仪时,推荐使用不透光的96孔白板或黑板,以减少孔间串扰并提高检测灵敏度。
  5. 若检测到样品中ATP水平明显低于预期,可在裂解后、离心前取部分样品煮沸2 min以充分释放 ATP,再进行检测。经煮沸处理的样品中蛋白已变性,不适用于蛋白定量、SDS-PAGE等实验,相关分析请使用未煮沸的平行样品。
  6. 本品仅适用于专业科研用途,严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域,且不得存放于住宅等非专业场所。
  7. 本产品对皮肤、眼睛和呼吸道有刺激性,为保障操作安全与人员健康,操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。

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